En 1980, Frederick Sanger a remporté son deuxième prix Nobel pour le développement d'une méthode pour synthétiser des fragments d'ADN et de mettre fin au brin chaque fois une certaine base d'ADN apparaît. Cela a permis aux chercheurs de déterminer les bases de la séquence d'un brin d'ADN et a été utilisé pour le séquençage du génome humain par le projet du génome humain. Les méthodes actuelles comprennent Polony, Solexa et ions séquençage semi-conducteur. Cependant, la méthode de Sanger est encore largement utilisé et, en raison de sa relative simplicité, est un bon exemple de la façon dont le séquençage de l'ADN fonctionne.
Instructions
1 Mettre en place quatre béchers avec quatre mélanges réactionnels. Ajouter dans chaque bécher de l'ADN à séquencer, l'ADN polymérase et une source de nucléotides A, C, G et T.
2 Ajouter une variante d'une des quatre variables de terminaison de chaîne marqués par fluorescence de chacun des nucléotides, de sorte que chaque récipient présente une grandeur différente de terminaison avec un marqueur fluorescent différent.
3 Combiner le contenu de chacun des quatre béchers de réaction en un seul récipient. Exécutez les réactions sur un gel d'électrophorèse. Déduire la séquence d'ADN en lisant l'image résultant de la plus petite à la plus grande pièce. Les différents marqueurs fluorescents qui identifient des bases nucléotidiques correspondant à chaque élément créant un ensemble unique de bandes sur l'image d'électrophorèse.
4 Lire la base de la séquence du brin d'ADN en affectant une base de chacune des bandes créées par les bases de nucléotides sur l'image d'électrophorèse.