Des procédés recombinants

September 17

Des procédés recombinants


Un morceau d'ADN recombinant comprend l'ADN provenant de deux sources différentes --- par exemple un gène codant pour une protéine fluorescente incorporée dans le génome d'une espèce entièrement différente. Les scientifiques utilisent une variété de techniques pour manipuler les acides nucléiques, joindre des morceaux d'ADN et d'insérer ces séquences recombinantes dans d'autres cellules. Ces techniques sont essentielles dans la biotechnologie moderne.

Les enzymes de restriction

Les enzymes de restriction, parfois appelées endonucléases de restriction, faire des coupes dans l'ADN sur les sites spécifiés par la présence d'une séquence de reconnaissance particulière. La classe la plus utile des enzymes de restriction, les enzymes de type II, faire des coupes sur le site de reconnaissance. Quand ils font une coupe, ils laissent un "bout collant" avec une extrémité en surplomb simple brin sur la molécule d'ADN. Depuis extrémités collantes de deux morceaux d'ADN coupés par la même enzyme sont complémentaires, les scientifiques peuvent couper deux morceaux d'ADN, afin d'avoir des extrémités complémentaires, puis les réunir.

Ligation

Les scientifiques utilisent souvent des plasmides, des petits morceaux circulaires d'ADN trouvés dans de nombreuses bactéries, de faire des copies d'un gène avec la technologie de l'ADN recombinant. Tant le plasmide et le fragment d'ADN qu'ils veulent insérer sont coupés avec les deux mêmes enzymes de restriction; maintenant à la fois le plasmide et l'insert ont des extrémités cohésives correspondantes. Incubation ces morceaux d'ADN avec une enzyme appelée ligase colles les extrémités cohésives correspondant ensemble. Cette dernière étape est appelée ligature ou re-ligature.

Transformation

Certaines bactéries peuvent naturellement prendre des morceaux d'ADN de leur environnement. Le cheval de bataille de laboratoire préféré, e. coli, ne figure pas parmi ces espèces; il peut être amené à absorber l'ADN, cependant, d'abord par incubation dans une solution de chlorure de calcium brièvement sur de la glace puis en incubant à des températures physiologiques (environ 37 degrés Celsius). Une petite fraction de l'e. coli, les bactéries absorbent les plasmides dans la solution. Une autre technique similaire, l'électroporation, implique électriquement "choquant" l'e. coli en exécutant un courant à travers la solution; à nouveau, ce qui provoque une petite fraction d'entre eux de l'ADN du plasmide. Ces deux méthodes --- ou toute autre méthode qui induit les bactéries à prendre un ADN étranger --- sont appelés transformation.

médias sélectifs

Certaines bactéries contiennent maintenant le plasmide recombinant, mais comment pouvons-nous savoir quelles bactéries font et ceux qui ne le font pas? La façon la plus courante pour séparer les cellules transformées du reste consiste à cultiver les bactéries sur "milieux sélectifs." Par exemple, une plaque de gélose contenant de l'ampicilline, un antibiotique, servira. Si le plasmide contient un gène conférant une résistance à l'ampicilline, seules les bactéries qui ont relevé le plasmide sera survivre et se développer. Ces méthodes permettent aux scientifiques d'insérer des gènes dans des bactéries ou faire des copies d'un morceau d'ADN.