La lyse cellulaire est la rupture ouverte de cellules, tout en causant le moins de dommages aux protéines, organelles, l'ADN et d'autres macromolécules que possible. La lyse des cellules est utilisée pour un certain nombre de techniques de biologie moléculaire, y compris le transfert de Western, analyse des protéines, le transfert de Southern et l'étude de séquences d'ADN cellulaire et. La molécule ou organite à l'étude détermineront la méthode utilisée pour lyser la cellule.
Mécanique
Il y a un certain nombre de méthodes mécaniques pour lyser les cellules, y compris les mélangeurs, les ultrasons et des homogénéisateurs. Cette méthode repose sur des lames pour broyer et de déplacer les tissus et les cellules. Elle est souvent utilisée pour les cellules qui sont difficiles à lyser, tels que les micro-organismes. Cependant, les tissus complexes, tels que le foie ou le rein, peuvent nécessiter une lyse mécanique. lyse mécanique se traduit souvent par une solution visqueuse qui est difficile à clarifier. La chaleur produite peut dénaturer les protéines d'intérêt.
tampons
Les détergents sont souvent utilisés pour lyser les cellules de mammifères. Cette méthode est plus doux en perturbant les membranes des cellules. Le détergent choisi dépendra de ce que les techniques du lysat cellulaire est à utiliser pour et les cellules qui doivent être lysée. Les cellules et les tampons sont souvent conservés au froid si vous étudiez les protéines afin d'éviter leur dénaturation. D'autres considérations sont les pH et les concentrations de sel et, si les inhibiteurs sont nécessaires pour éviter la dénaturation des protéines.
Thaw Gel
Les cellules peuvent être congelées et décongelées et, au cours d'un certain nombre de cycles, la cellule lyseront. Cette méthode provoque la cellule à gonfler et sous forme de cristaux de glace, ce qui provoque la membrane cellulaire à casser et libérer le contenu de la cellule. Une étude réalisée par Haifeng Yu et ses collaborateurs pour Bio-Rad, en 2006, a montré que l'addition d'un cycle de congélation-décongélation avec sonication, dans des types de cellules de mammifères, a amélioré la sensibilité de certaines protéines par rapport à seulement sonication.
Homogénéisation liquide
Les cellules sont forcées à travers un espace étroit, qui se décompose de la membrane cellulaire. Un certain nombre de différents types d'homogénéisateurs sont disponibles, bien que l'équipement peut être coûteux. Le nombre de fois que les cellules doivent traverser dépend des cellules et du matériel utilisé. Rendement, cependant, peut être variable.