Les bactéries Gram négatif donnent un résultat négatif au test de coloration de Gram, car ils ont à la fois une surface intérieure et une membrane externe d'une mince couche de peptidoglyans entre les deux. Une fois que les microbiologistes ont déterminé qu'un isolat est Gram-négatif, ils peuvent effectuer diverses autres tests biochimiques pour réduire l'éventail de possibilités et d'identifier le genre.
Glucides fermentation
Dans ce test, les bactéries sont mises en culture dans un bouillon contenant l'indicateur de pH rouge de phénol, avec un petit tube inséré à l'envers dans le tube d'essai. En général, quatre tubes sont utilisés - l'un avec le bouillon glucose, une autre avec du lactose, un troisième avec du saccharose et un quatrième avec le mannitol. Lorsque les bactéries fermente les sucres, il produit des sous-produits acides qui diminuent le pH de la solution, ce qui provoque l'indicateur rouge de phénol à jaunir. Certaines bactéries peuvent également créer des produits alcalins, bien que le test d'hydrate de carbone de fermentation n'a pas été conçu pour détecter ces derniers. Les bactéries peuvent être classées en fonction des types de sucres, ils fermentent et si elles produisent de l'acide et du gaz ou de l'acide seul.
SIM test
Le test SIM incorpore trois épreuves distinctes dans une procédure unique et pratique. Les bactéries sont introduites dans l'agar en piquant avec une boucle d'inoculation. L'agar contient un mélange d'acides aminés et deux indicateurs, le nitrate de plomb et du réactif de Kovac. Si les bactéries métabolisent les acides aminés contenant du soufre, des formes de sulfure d'hydrogène et se combine avec le nitrate de plomb, en tournant le noir de gélose. Si les bactéries métabolisent le tryptophane, un acide aminé, ils forment indole qui réagit avec le réactif de Kovac, ce qui rend un anneau rouge vif. Enfin, si les bactéries sont capables de se déplacer, ils se propagent vers l'extérieur à partir du point où ils ont été introduits initialement. Si elles ne peuvent pas se déplacer, leur croissance reste concentrée autour de l'endroit où l'agar-agar a été poignardé.
Citrate et uréase Tests
Le test utilise le citrate de gélose au citrate de couleur verte, qui contient de l'acide citrique et un indicateur de pH. Si les bactéries ont l'enzyme citrate perméase, ils métabolisent le citrate et produire des produits alcalins qui provoquent l'indicateur de pH change de couleur au bleu. Le test de l'uréase, en revanche, utilise un bouillon d'urée orange avec un indicateur rouge de phénol à un faible niveau. Certaines bactéries ont une enzyme appelée uréase et peut décomposer l'urée en dioxyde de carbone et l'ammoniac. L'ammoniac est alcalin et modifie le pH. Si le bouillon devient pourpre rougeâtre, les bactéries sont uréase-positif.
Phénylalanine désaminase test
Ce test utilise la gélose contenant de la phenylalanine amino-acide. Si les bactéries introduites dans la gélose possèdent la phénylalanine désaminase, une enzyme, ils décomposent l'acide aminé en acide phénylpyruvique par élimination du groupe amino. Les bactéries sont autorisés à croître pendant un certain temps, puis du chlorure ferrique est ajouté. La couleur sera soit rester inchangé, dans ce cas, les bactéries ne sont pas l'enzyme, ou il devient vert olive, auquel cas les bactéries ont l'enzyme.
Identification
Ces tests peuvent être utilisés pour identifier des bactéries Gram-négatives appartenant à un genre couramment rencontrée. Salmonella, par exemple, est le lactose négatif, uréase négatif, PA désaminase négative et de l'acide-seulement (pas de gaz) positif pour le glucose, et il peut se déplacer (est motile). E. coli, en revanche, est le lactose positif, le glucose négatif, citrate négatif, l'hydrogène sulfuré négatif, indole-positif et capable de se déplacer. En effectuant ces tests, microbiologistes peuvent comprendre quel type de bactéries étaient présentes dans un échantillon, ce qui est particulièrement important pour le suivi des foyers de la maladie.