Western blot, une technique d'analyse utilisée pour identifier une protéine spécifique dans un échantillon donné, utilise la capacité d'une enzyme ou un anticorps primaire marqué par fluorescence se lier à son antigène spécifique. Il est un processus en trois étapes commençant par électrophorèse sur gel, suivie par une membrane blot et de sondage avec des anticorps. la détection de la protéine peut être directe ou indirecte avec celle-ci en utilisant un anticorps secondaire marqué dirigé contre le premier. Bien accepté comme une technique d'analyse de protéines de routine, western blot a des limites ainsi que des avantages.
Avantage: Sensibilité
Un des plus grands arguments en faveur de western blot est sa sensibilité. En raison de sa capacité à détecter aussi peu que 0,1 ng de protéine dans un échantillon, cette technique peut théoriquement servir d'outil diagnostique précoce et efficace, détecter la moindre réponse immunogène d'un virus ou d'une bactérie dans un échantillon de patient. Un buvardage de western en outre indirecte repose sur cette sensibilité de la capacité de l'anticorps secondaire pour amplifier l'intensité du signal détecté par le système d'imagerie. signifie une plus grande sensibilité que moins d'anticorps sont nécessaires pour les tests, ce qui réduit les coûts de laboratoire de manière significative.
Avantage: Spécificité
La technique western blot doit sa spécificité à deux grands facteurs contributifs. Tout d'abord, l'électrophorèse sur gel trie un échantillon dans les protéines de taille différente, la charge et la conformation. Ce processus en lui-même est un grand pas vers la détection, sous forme de bandes formées dans le gel donnent déjà des indices sur la taille de la protéine ou d'un polypeptide d'intérêt. La spécificité de l'interaction anticorps-antigène sert le deuxième facteur important. Étant donné que les anticorps spécifiques présentent une affinité pour des protéines spécifiques, le procédé est capable de détecter sélectivement une protéine cible, même dans un mélange de 300.000 protéines différentes.
Inconvénient: Enclin à des résultats faux ou subjectifs
En dépit de sa sensibilité et de spécificité, un western blot peut encore produire des résultats erronés. Un des résultats faussement positifs lorsqu'un anticorps réagit avec une protéine non-prévue, ce qui arrive souvent quand un patient testé pour le VIH arrive à avoir la tuberculose ou un certain nombre d'infections parasitaires. Un faux-négatif, d'autre part, peut facilement entraîner des protéines plus grandes ne sont pas suffisamment de temps pour transférer correctement à la membrane. Une mauvaise blot et le traitement produisent souvent biaisés, fané, ou même plusieurs bandes, ce qui rend les résultats des tests sous réserve de l'interprétation du technicien.
Inconvénient: coût élevé et la demande technique
Le coût d'un western blot est un composite des grandes dépenses individuelles pour les anticorps marqués, les analystes qualifiés et de matériel de laboratoire. Un processus délicat, western blot exige de la précision dans toutes les étapes pour l'identification correcte des constituants d'un échantillon. Une erreur mineure dans la concentration de réactif ou la période d'incubation peut être désastreux pour l'ensemble du processus. Enfin, l'équipement nécessaire pour la détection et l'imagerie - chimioluminescent, ou des systèmes fluorescents, radioactifs détection laser - peut être trop coûteux pour l'unité de microbiologie moyenne.