Afin d'étudier correctement une protéine spécifique, il est essentiel d'être en mesure de le purifier ou le séparer de toutes les autres protéines et des composés présents dans les cellules. Une variété de techniques et protocoles ont été développés pour isoler des protéines spécifiques.
Les types
La purification des protéines débute généralement par fractionnement, au cours de laquelle les membranes cellulaires sont rompues ou perturbées (par addition d'un détergent, par exemple). L'homogénat résultant est centrifugé à grande vitesse dans une centrifugeuse pour séparer les composants cellulaires spécifiques.
Fonction
Une fois que le composant cellulaire contenant la protéine d'intérêt a été extraite par centrifugation, la protéine peut être isolée par Chromatographie. Il existe une variété de techniques chromatographiques, mais tous fonctionnent selon le même principe de base. Le mélange est forcé à travers une colonne remplie d'une matrice de billes ou de petites particules qui interagissent avec les protéines et les composés dans le mélange. En fonction de la taille, la charge ou d'autres propriétés des protéines, la matrice de la colonne va interagir plus fortement avec certains d'entre eux que d'autres, de sorte que certains d'entre eux ressortiront de la colonne avant les autres. Selon la technique, une série de procédures de ce type peut être nécessaire de purifier une protéine particulière.
Considérations
Test de l'échantillon est une partie importante de la purification des protéines. L'électrophorèse sur gel est une technique qui sépare les protéines en fonction de leur taille ou le pH auquel elles ont pas de charge nette; souvent l'électrophorèse en gel est utilisé en tant que traitement d'appoint à des techniques de séparation chromatographique pour assurer la protéine d'intérêt a été réellement isolé. Les biologistes peuvent également concevoir des essais ou des tests pour identifier la protéine d'intérêt et de déterminer sa concentration dans un échantillon. Si une protéine catalysant une réaction, par exemple, le biologiste peut tester la protéine par l'addition du produit chimique modifie la protéine dans l'échantillon et la vérification pour voir si la réaction se produit.