Comment faire pour dépanner un Primer Dimer

August 9

Comment faire pour dépanner un Primer Dimer


La réaction en chaîne par polymerase, ou PCR, est une technique de biologie moléculaire utilisées pour amplifier des régions spécifiques de l'ADN. La PCR est dépendante des amorces, qui sont des brins courts d'ADN qui sont complémentaires et spécifiques à l'ADN d'intérêt. Alors que les amorces généralement se lient à l'ADN correspondant à leur séquence, ils vont parfois se lier à et amplifier les uns des autres, ce qui provoque le phénomène connu sous le nom d'un dimère d'amorce.

Instructions

1 Examiner la teneur en GC (nombre de G et C de ce) dans votre séquence d'amorce. une liaison GC est plus forte que la liaison A cause de la liaison hydrogène supplémentaire entre la guanine et la cytosine. liaison optimale est d'au moins 50 pour cent du contenu de GC.

2 Examinez la température de recuit de votre réaction. basses températures de recuit, généralement définis comme 55 ° C ou au-dessous, peuvent provoquer la liaison non spécifique de l'amorce, ce qui peut provoquer des dimères d'amorces, en plus de l'amplification génomique des sections incorrectes.

3 Double-vérifier la quantité et la concentration des amorces que vous avez ajouté à la PCR. Un excès d'amorces, généralement plus de 75 picomoles, peut provoquer des dimères d'amorces, aussi bien.