Comment analyser Gel Electrophoresis

November 20

Comment analyser Gel Electrophoresis


L'électrophorèse est le mouvement des molécules en fonction de la charge électrique. En tirant parti de la porosité des gels d'agarose et par le fait que l'ADN a un squelette phosphate négativement chargé, les scientifiques peuvent séparer des fragments d'ADN selon leur taille sur un gel d'agarose en appliquant un courant à lui. Différentes tailles de fragments fonctionnent à des vitesses différentes; petits fragments se déplacent plus rapidement à travers le gel que les gros fragments. La détermination de la taille d'une molécule par la séparation de celui-ci à partir d'autres fragments moléculaires permet aux scientifiques dans des expériences génétiques et protéomiques.

Instructions

1 Mettez les gants en nitrile.

2 Soigneusement transférer le gel d'agarose de la boîte de gel à la boîte de source de lumière UV. gels d'agarose peuvent se déchirer ou casser, donc quand vous transférez le gel, le transférer sur un objet plat solide comme une feuille de plastique dur.

3 Mettez les lunettes résistant aux UV.

4 Allumer la source de lumière UV.

5 Prenez une photo du gel avec l'appareil photo.

6 Imprimer la photo.

7 Notez les tailles connues des bandes de fragments dans la voie de l'échelle en fonction de la clé de l'échelle que vous avez utilisé directement sur la photo.

8 Déterminer la taille relative des bandes dans les couloirs de l'échantillon.

9 Comparer la taille de la bande attendue à la taille de bande mesurée. Si elle correspond, votre réaction en chaîne par polymérase (PCR) ou une réaction enzymatique travaillé. Sinon, vérifiez les amorces ou plasmides une deuxième fois et confirmer la taille attendue. Si le groupe est toujours un mystère et est répété, envisager d'envoyer ce morceau de gel à une installation de séquençage de l'ADN pour l'analyse.

Conseils et avertissements

  • Il y a souvent un groupe constitué d'amorces au fond des couloirs sur un gel d'électrophorèse de bromure d'éthidium. Ce n'est pas une bande d'ADN répliqué et doit être ignorée.
  • Exécution de gels plus lent a tendance à donner des bandes plus propres. Pour ce faire, réduire le courant dans la boîte de gel. Si les résultats du gel doivent être publiés, exécutez le gel à une très faible au lendemain en cours.
  • Lors de la manipulation des gels contenant du bromure d'éthidium, toujours porter des gants en nitrile. Le bromure d'éthidium est une très petite molécule et peut passer à travers le latex.
  • Ne jamais utiliser de l'eau de Javel pour nettoyer une zone qui a été contaminé avec du bromure d'éthidium. Agent de blanchiment réagit avec du bromure d'éthidium et produit des produits de réaction extrêmement dangereux.
  • Lire la fiche de données de sécurité (FDS) pour le bromure d'éthidium avant de travailler avec elle.