l'acide désoxyribonucléique (ADN), les techniques d'extraction d'os ont un protocole semblable à du tissu et de l'ADN de cellules d'extraction, ce qui nécessite généralement une lyse des échantillons. Parce que l'os possède une surface plus impénétrable, cependant, la plupart des protocoles d'extraction nécessitent une pulvérisation. Par ailleurs, si la pulvérisation est pas une méthode réalisable ou préféré, la nouvelle biotechnologie offre des tubes qui utilisent la pression pour extraire l'ADN de petits fragments d'os.
stérilisation
Comme étape en commençant à tout type d'extraction d'ADN, la stérilisation doit être effectué afin de minimiser la contamination croisée. Les surfaces des échantillons d'os doivent être traités d'abord avec l'eau de Javel et d'eau distillée. En outre, tous les instruments et les outils doivent être stérilisés dans un autoclave à haute température. Pour les instruments plus importants (c.-à-pulvérisateurs) qui ne peuvent pas être autoclavés, l'eau de Javel et l'alcool devraient être utilisés pour nettoyer les surfaces à fond avec laquelle l'échantillon peut entrer en contact. En outre, le pipetage et la manipulation des échantillons doivent être effectués dans une hotte de plexiglas bien ventilé.
Méthode Pulvérisation
Une fois que les échantillons d'os ont été lavés avec l'eau de Javel et de l'eau distillée, les surfaces extérieures doivent être poncées avec un petit instrument de disque. Ce processus permettra d'éliminer la contamination de l'ADN étranger et d'exposer certains tissus de l'os mou nécessaire pour l'extraction. Les échantillons d'os peuvent ensuite être broyés en une poudre fine pour l'extraction. Pour environ 750mg de poudre d'os, 1,6 ml de tampon de digestion est nécessaire. Selon un procédé publié dans "Nucleic Acids Research" digest tampon doit consister en .1M d'EDTA, une solution de sel, et de la proteinase K. Cette digestion doit être placé pendant une nuit à 37 ° C pour permettre une digestion optimale du tissu osseux pour l'extraction de l'ADN .
Après digestion pendant une nuit, les échantillons doivent être centrifugés à une vitesse élevée pendant 15 à 30 minutes pour permettre à tout le matériel nécessaire au culot. Le surnageant est ensuite prélevé et ajouté à un mélange acétate d'ammonium, un sel et une solution d'éthanol pur pour la précipitation. Cette préparation est plus facile à faire dans des tubes Eppendorf étiquetés et ensuite placé dans la glace sèche pour la précipitation optimale. Les tubes peuvent ensuite être centrifugés après environ une heure d'incubation dans de la glace sèche. Après le précipité est formé, retirer le surnageant (vérifier soigneusement pour une pastille) et de dissoudre le culot dans 20 à 50 microlitres d'eau déminéralisée stérilisée.
Méthode non pulvérisé
Une société de biotechnologie nommée Pressure BioSciences Inc. a créé une nouvelle méthode pour l'extraction de l'ADN des os qui ne nécessite pas de pulvérisation. La méthode utilise la technologie de cycles de pression (PCT) pour extraire l'ADN. Cette technologie est revendiquée pour éliminer la contamination croisée qui survient souvent de l'utilisation d'un pulvérisateur. Semblable à la méthode pulvérisé, cependant, des échantillons d'os doivent encore être stérilisés dans l'eau de Javel et de l'eau distillée avant la préparation et martelé en fragments plus petits d'environ 250mg afin d'intégrer dans les tubes PULSE du kit.