Les inconvénients de Gel Electrophoresis

May 14

Les inconvénients de Gel Electrophoresis


L'électrophorèse sur gel est une technique dans laquelle les molécules biologiques sont séparées les unes des autres et identifiés dans la recherche biologique ou diagnostic médical. Depuis leur développement dans les années 1970, ces techniques ont été précieux dans l'identification des gènes (ADN) et des produits de gènes (ARN et protéines) de recherche d'intérêt. Au cours des dernières années, de nouvelles techniques sont apparues qui donnent une plus grande spécificité et des détails à propos de ce qui se passe dans les systèmes vivants. Bien que ceux-ci ne sont pas supplanté les techniques d'électrophorèse, et les manipulations avancées peuvent étendre la viabilité de la technique, il est important de réaliser ce que l'électrophorèse sur gel peut et ne peut pas faire.

Electrophorresis A Analyse d'échantillon limitée

Les inconvénients de Gel Electrophoresis

Chaque échantillon d'électrophorèse ne porte que sur une petite zone de tissu.

Electrophoresis est spécifique à ce que le tissu que vous avez échantillonné. Par exemple, si vous exécutez un transfert de Southern (un type d'électrophorèse) sur un frottis buccal, vous êtes à la recherche sur les gènes des cellules épithéliales de votre joue et nulle part ailleurs dans votre corps. Parfois, cela peut être bénéfique, mais les chercheurs sont souvent intéressés par des effets plus répandus.

Des techniques telles que l'hybridation in situ (ISH) peuvent prendre en une section de tissu et d'analyser l'expression des gènes au niveau de chaque petite zone de cet échantillon. Ainsi, les chercheurs peuvent regarder chaque zone du cerveau dans un échantillon avec ISH, alors que les techniques d'électrophorèse ne peuvent regarder quelques zones à la fois.

Mesures d'électrophorèse ne sont pas précis

L'électrophorèse sur gel peut effectivement séparer des protéines similaires avec des poids différents (ce qui est une technique appelée Western blot). Il peut les séparer plus précisément grâce à une technique connue sous le nom électrophorèse 2d; ce qui est commun en protéomique.

Malheureusement, toutes les mesures effectuées à partir de cette technique sont semi-quantitative au mieux. Afin d'obtenir la masse précise (en poids) des protéines, la spectroscopie de masse doit être utilisée après que la protéine a été purifiée par électrophorèse. En outre, en comparant les quantités relatives des différentes molécules dépend de la densité de la bande (obscurité) de différentes taches sur le gel. Cette méthode a un certain degré d'erreur, et les échantillons sont habituellement exécuté plusieurs fois pour obtenir des résultats propres.

Substantielle échantillon de départ est requis

Les inconvénients de Gel Electrophoresis

L'électrophorèse sur gel nécessite une grande quantité d'ADN ou d'une protéine de départ.

L'électrophorèse est une technique consistant à isoler et à identifier visuellement différentes biomolécules. Ceci est réalisé en faisant passer un courant électrique à travers le gel pour séparer des molécules chargées ayant des poids différents. Si la molécule qui vous intéresse est pas assez commune, sa bande sera pratiquement invisible et difficile à mesurer.

ADN et l'ARN peuvent être amplifiés peu avant d'exécuter l'électrophorèse, mais il est peu pratique de le faire avec des protéines. Par conséquent, un grand échantillon de tissu est nécessaire pour exécuter ces tests. Cela peut limiter l'utilité de la technique, en particulier dans les analyses médicales. Il est pratiquement impossible de faire fonctionner l'électrophorèse sur des échantillons à partir d'une seule cellule; cytométrie en flux et immunohistochimie sont plus couramment utilisé pour évaluer l'expression, cellule par cellule des protéines. Une technique appelée PCR est excellent à mesurer précisément de petites quantités d'ARN.

Seuls certains Molécules peuvent être visualisées

Electrophoresis est excellent à séparer et à moyen d'identification à grande taille biomolécules. Cependant, la plupart des molécules que les chercheurs souhaitent étudier sont plus petits; de petites hormones, les neurotransmetteurs, et les ions ne peuvent pas être mesurés par électrophorèse. Ceci pour deux raisons: ils ne réagissent pas correctement avec la préparation d'électrophorèse (habituellement une technique appelée SDS PAGE) et, même si elles le faisaient, ils sont trop petits pour séparer correctement et se précipitaient sur le fond du gel. Ces molécules sont plutôt mesurées par des techniques telles que les dosages immunologiques RIAAs (radio) et des tests ELISA (Test immunoenzymatique).

Electrophoresis est faible débit

L'électrophorèse sur gel est généralement un faible débit, ce qui signifie qu'il ne se produit pas de données particulièrement rapide. Contraste électrophorèse, où vous pouvez regarder une petite poignée de molécules d'ARN à la fois, avec la PCR (réaction en chaîne par polymérase), qui peut simultanément évaluer des milliers d'échantillons. De même, la cytométrie en flux peut prendre des mesures à partir des milliers de cellules individuelles et de faire des corrélations complexes, alors que l'électrophorèse regarde les cellules en masse et ne peut pas faire de telles discriminations fines. PCR et le débit représentent cytométrie massivement processus parallèles et série, respectivement, et les deux dépassent de loin les capacités de l'électrophorèse pour générer des données de recherche.