Lorsque la purification de protéines, vous devez être en mesure de calculer leur concentration. Il existe une variété de façons de le faire, y compris le test Biuret, le dosage Lowry, le dosage BCA et le dosage de Bradford, qui ont tous des avantages et des inconvénients. En fin de compte, cependant, ils fournissent tous essentiellement la même information: absorbance d'un échantillon dilué par rapport à l'absorbance à la même longueur d'onde pour des solutions de concentration standard. Lorsque vous avez ces données, vous pouvez l'utiliser pour calculer votre concentration en protéines.
Instructions
1 Connectez-vous à votre programme de feuille de calcul et entrez les données pour les normes dans une nouvelle feuille de calcul. Mettez "molarité" des protéines dans la solution étalon dans une colonne et "absorbance" à la longueur d'onde que vous avez utilisé dans un autre.
2 Graphiquement les données de normalisation et d'étiqueter votre graphique. Assurez-vous molarité est sur l'axe x et l'absorbance est en ordonnée.
3 En utilisant les outils de régression ou de la ligne de tendance linéaire dans votre programme de tableur, trouver une ligne de meilleur ajustement pour vos données. Si nécessaire, consultez le manuel utilisateur de votre programme de feuille de calcul pour obtenir des instructions.
4 Prenez l'absorbance pour vos solutions de protéines de concentration inconnue et branchez-les dans l'équation dérivée par votre programme de feuille de calcul. Vous pouvez utiliser votre programme de feuille de calcul pour effectuer les calculs pour vous s'il sera utile.
Exemple: Si votre programme de feuille de calcul dérivée de l'équation y = 0,5 x + 0,4, où y est absorbance et x est molarité, vous pouvez résoudre cette équation pour x en réorganisant comme suit:
(Y - 0,4) / 0,5 = x
puis branchez votre mesure d'absorbance pour y comme suit:
(0,5-0,4) / 0,5 = x
0,1 / 0,5 = 0,2 mole par litre
Conseils et avertissements
- Notez que la concentration en protéine est généralement calculée en termes de microgrammes par microlitre plutôt que moles par litre, bien que vous pouvez utiliser molarité à la place si vous préférez.