La rupture des cellules est une technique de laboratoire utilisée pour briser les cellules ouvertes afin d'en extraire les composants cellulaires intérieurs pour des fins d'étude ou de synthèse. Parmi les nombreuses méthodes différentes de rupture cellulaire physique disponibles, la méthode choisie doit être adaptée à la demande en vue de perturber la cellule, mais garder les protéines d'intérêt en bon état.
Bead Fraisage
fraisage perle est le procédé de rupture mécanique des cellules en les agitant en présence de petites perles. Ce procédé soumet les cellules à des forces d'impact lorsqu'ils entrent en collision avec des billes, des forces de cisaillement provoquées par le déplacement du liquide dans lequel les cellules sont suspendues et broie les cellules entre les billes. Perle de fraisage est approprié pour les cellules végétales ou animales, ainsi que pour la levure et des cellules bactériennes, bien que différentes tailles et de compositions de perles sont appropriées pour chaque type de cellule. Selon la Qiagen Sample & Assay Technologies, les billes optimales à utiliser sont: «0,1 à -0,6 mm moyenne des perles de verre de petit diamètre pour des bactéries, des perles de verre de 0,5 mm pour les cellules de levure et d'animaux unicellulaire, et l'acier inoxydable 3--7 mm ou de carbure de tungstène perles pour les tissus végétaux et animaux. " fraisage bourrelet perturbe les cellules et homogénéise leur contenu en une seule étape.
Ultrasonic cellulaire Perturbation
des ondes ultrasonores dans la plage de 18 kHz ou plus, qui sont inaudibles, peuvent être utilisées pour rompre les cellules. La production d'ondes sonores perturbe les cellules de deux manières. En premier lieu, les ondes sonores provoquent le mouvement de fluide entourant les cellules, qui est suffisante pour cisailler les cellules et "couper" ouverts. D'autre part, les ondes ultrasonores provoquent cavitation; les ondes sonores provoquent des bulles de gaz pour former et lorsque ces bulles éclatent, ils provoquent une onde de choc physique qui est assez forte pour la grotte dans les membranes cellulaires ou les parois des cellules, ce qui provoque leur rupture.
choc osmotique
Choc osmotique utilise l'incapacité de la cellule pour faire face aux fluctuations rapides des concentrations de solutés externes afin de forcer la cellule ouverte avec la pression osmotique. Cette méthode consiste à laisser les cellules acclimater à des niveaux élevés de solutés externes, souvent le saccharose, puis en diluant rapidement loin du saccharose. La cellule, dans une tentative d'équilibrer les pressions osmotiques, alors prendre l'eau si rapidement que sa pression interne va augmenter et la cellule va éclater.
Homogénéisation haute pression
Dans ce mode de rupture cellulaire, d'un liquide dans lequel les cellules sont mises en suspension est forcée à travers un orifice étroit sous haute pression. Les cellules sont soumises à des forces d'impact sur la suppression de la buse, les forces de cisaillement par le mouvement des forces de goutte de liquide et de pression après avoir quitté la buse.