Des enzymes, des groupes de protéines, sont généralement isolées à partir d'échantillons de tissus et purifiés pour une utilisation expérimentale. Les méthodes expérimentales peuvent permettre la compréhension de la fonction des cellules et des voies métaboliques. Chromatographie et d'autres méthodes ainsi que des conditions ajustées de pH, concentration en sel, etc., sont choisis en fonction des types d'enzymes étant purifié.
Précipitation
La première méthode de purification de l'enzyme utilise la technique de précipitation en fonction de la concentration en sel. Le sulfate d'ammonium est une solution couramment utilisée dans ce procédé. Habituellement, la solution de protéine / enzyme est amené à une saturation de 50 pour cent avec une solution de sulfate d'ammonium saturé. En raison de l'équilibre du sel, les protéines se coagulent et précipitent au fond quand on centrifuge à une vitesse élevée pendant environ 15 minutes.
Chromatographie
les méthodes de chromatographie échangeuse d'ions comprennent des bio-affinité et l'hydrophobie. L'échange d'ions utilise la charge moléculaire et bio-affinité utilise l'interaction biomoléculaire. La préparation initiale de ces méthodes comprend la lyse des cellules et centrifugation pour un surnageant pur. Les surnageants contiennent les enzymes isolées appropriées et peuvent être en outre purifiés par l'une des méthodes de Chromatographie ci-dessus.
La filtration sur gel
La filtration sur gel est un procédé de chromatographie en fonction de la masse moléculaire de l'échantillon d'enzyme souhaitée. La méthode utilise des perles qui viennent dans différentes tailles de pores. Les pores de ces perles contiennent les protéines appropriées qui sont destinés à filtrer. Une fois que tout d'un échantillon est exécuté par le biais, les billes sont extraites pour les enzymes purifiées.