En biologie cellulaire, il est souvent nécessaire de coordonner ou "synchroniser" les cellules dans une culture de sorte que la majorité des cellules sont au même stade de développement ou mitose en même temps. Cette synchronisation permet aux scientifiques d'étudier la façon dont le développement des cellules est affectée par divers changements dans les conditions de croissance des cellules telles que la température et les différences de lumière, ou l'introduction de produits chimiques ou d'agents viraux. La synchronisation requiert le développement des cellules arrêt une fois la cellule atteint un certain stade. De nombreuses méthodes existent pour arrêter le développement; dont l'un est l'introduction d'une substance telle que nocodazole à la culture cellulaire.
Instructions
1 Séparer le moyen de votre culture cellulaire. Rincer la culture cellulaire avec dix millilitres de la solution tampon phosphate.
2 Placez la culture rincés dans une boîte de Pétri avec le milieu complet avec nocodazole. Incuber le plat avec le milieu de culture et à 37 degrés Celsius pendant 12 heures.
3 Retirer le plat de l'incubateur. Rincez avec le milieu de culture, puis appuyez sur le plat légèrement. Les cellules mitotiques rondes vont secouer lâche et peut être mis au rebut.
4 Transférer le milieu complet à partir de la boîte de Petri dans les tubes en polypropylène. Cap les tubes puis centrifuger eux à 1000 xg (environ 1600 rpm) pendant 10 minutes.
5 Utilisez la pipette pour éliminer le surnageant (liquide dans les tubes centrifugés). Ajouter 15 ml de solution de tampon phosphate dans chaque tube pour remettre en suspension le solide restant (le culot de cellules). Centrifuger les tubes à 1000 g pendant 10 minutes.
6 Utiliser la pipette pour éliminer le surnageant dans chaque tube. Ajouter un milieu complet (sans nocodazole). Les cellules sont maintenant prêts à utiliser pour votre expérience.
Conseils et avertissements
- Chaque laboratoire a une recette différente pour un milieu complet et milieu de culture. Suivez les protocoles de votre laboratoire.