Electrophorèse sur gel de protocoles

January 31

Electrophorèse sur gel de protocoles


L'électrophorèse sur gel utilise la capacité des molécules de passer à travers un gel ou d'une matrice en réponse à un courant électrique. Elle sépare les protéines, l'ADN ou de l'ARN basée sur la taille et la charge de la molécule. L'électrophorèse sur gel est utilisé en médecine légale, la génétique, l'analyse des protéines et la biologie moléculaire. Les molécules dans le gel peuvent être visualisées et enregistrées par l'utilisation des caméras et des ordinateurs.

Western blot

Transfert de Western permet l'étude des protéines spécifiques à l'aide d'une électrophorèse sur gel et des anticorps. Les protéines ont souvent une structure complexe et ont besoin d'être dénaturé par l'utilisation de la chaleur et des détergents; ces substances aussi enrober la protéine pour lui donner une charge négative. Les protéines se déplacent à travers le gel, le plus souvent l'acrylamide, en fonction de leur taille. Une fois séparé du gel les protéines peuvent être transférées sur une membrane, qui peut ensuite être colorées pour les protéines spécifiques en utilisant des anticorps. Les protéines peuvent être visualisées en utilisant de nombreuses techniques et de la quantité de protéine peut être déterminée.

zymographie

Zymographie est basé sur buvard mais études enzymes occidentales. L'acrylamide dans le gel est copolymérisé avec un substrat tel que la gélatine. A la différence transfert de Western, les enzymes ne sont pas traitées avec un détergent. Une fois que les enzymes sont déplacés à travers le gel, l'acrylamide est éliminée chimiquement, et le gel est placé à 37 ° C dans un tampon pour promouvoir l'activité enzymatique. Le gel est souvent coloré avec du bleu de Coomassie et les domaines d'activité de l'enzyme reste unstained ou claire.

Agarose Gel Electrophoresis

une électrophorèse sur gel d'agarose peut séparer les protéines, l'ARN ou l'ADN. Les acides nucléiques sont séparés par leur taille, avec de plus petites molécules se déplaçant plus rapidement à travers le gel, tandis que les protéines sont séparées par une charge en raison de la taille des pores dans un gel d'agarose. Ces gels peuvent être utilisés en génétique pour étudier les acides nucléiques. Pour visualiser un acide nucléique, qui fluoresce sous rayonnement ultraviolet (UV), le bromure d'éthidium est souvent utilisée; cependant, le bromure d'éthidium provoque des mutations génétiques donc des alternatives plus sûres sont disponibles.

Électrophorèse bidimensionnelle

électrophorèse bidimensionnelle est utilisé pour séparer les protéines. Les protéines sont séparées par leur charge, puis par leur masse. Il est souvent utilisé en protéomique pour étudier l'expression de la protéine globale dans un tissu ou un organisme, et peut également déterminer les différences d'expression protéique entre les tissus.