Sans travailler avec de bonnes techniques stériles, des expériences de culture cellulaire peut être un cauchemar. La contamination est commune. Il existe de nombreuses procédures et les étapes qui doivent être prises pour réduire ou éliminer le risque de contamination tout en travaillant avec les cultures nécessaires. Pratiquer de bonnes techniques stériles fait gagner du temps, de l'énergie et de l'argent.
Flammes
Toujours ouvertures de bouteille flamme lorsque vous versez tout ce qui sort d'une bouteille. Ceci est non seulement pour stériliser l'ouverture extérieure de la bouteille, mais de créer un courant d'air chaud provenant de l'ouverture de la bouteille. Ce courant d'air chaud monte et repousse la chute des particules de poussière ou des germes qui pourraient autrement contaminer le contenu de la bouteille.
boucles d'inoculation doivent toujours être flambé entre les utilisations. Lorsque vous travaillez avec des boîtes de Pétri et des boucles, un petit contenant de 100 pour cent d'éthanol à proximité. Aussi ont une lampe de flamme d'alcool ou le brûleur Bunsen à portée de main. Pour stériliser la boucle d'inoculation, le tremper dans l'éthanol et l'exécuter à travers la flamme. Tenez-le jusqu'à ce que le feu se éteint sur la boucle, puis touchez à la gélose de la boîte de Petri pour le refroidir. Il est prêt à l'emploi avec des cellules une fois que la boucle ne fait pas fondre la gélose au contact.
Travailler sous une hotte
Toujours travailler sous une armoire bio-sécurité lorsque vous travaillez avec des cultures de cellules. armoires Bio-sécurité diffèrent des hottes à flux laminaire, car l'air est filtré; dans les hottes à flux laminaire, l'air est simplement distribué. L'air filtré représente une forte diminution du risque de contamination pour les cultures cellulaires.
Incubateur Propreté
Toujours travailler avec un incubateur qui est exempt de cultures contaminées. Si vous trouvez une culture cellulaire a été inoculée avec soit un contaminant bactérien ou une levure, nettoyer l'incubateur immédiatement et ne pas mettre de nouvelles cultures de cellules en elle. Il ne sert à rien d'essayer puisque la levure peut être un contaminant dans l'air et la contamination bactérienne se propage facilement par contact.
Lorsque vous nettoyez un incubateur, autoclave toutes les pièces amovibles et essuyez l'intérieur avec une solution d'eau de Javel à 10 pour cent, suivi d'un rinçage. Ensuite, essuyez l'intérieur de l'incubateur avec une solution d'éthanol à 70 pour cent et le laisser sécher à l'air. Ne pas oublier d'éteindre l'injecteur de dioxyde de carbone et les alarmes associées lorsque vous nettoyez l'incubateur parce que la porte lui sera ouverte pendant une période de temps prolongée.
La filtration stérile
Certains médias peuvent être stérilisés par autoclavage sur un cycle liquide, comme milieu de gélose pour les colonies de boîte de Pétri. D'autres types de culture cellulaire, en particulier contenant des protéines, ne devraient pas être autoclavés parce que la chaleur et la pression dénaturent les protéines. Ces milieux doivent être stérilisés par filtration. Les contaminants qui peuvent détruire le milieu de culture cellulaire sont supérieures à 0,22 um, de manière à filtrer le milieu à travers une unité de filtration jetable avec un filtre de 0,22 um de taille de pores rend un milieu stérile.
autoclavage
Lorsque autoclavage outils et conteneurs, toujours utiliser du ruban autoclave. Couvrir toutes les ouvertures du récipient avec du papier et de mettre un morceau de ruban autoclave sur la feuille. Lorsque autoclavage liquides comme milieu de gélose ou de l'eau, utiliser un paramètre de liquide de sorte qu'il ne déborde pas que la pression est réduite. réglages liquides réduisent la pression à l'intérieur de l'autoclave plus lentement que les réglages secs pour correspondre à la lente diminution de la température. Ceci empêche le liquide de se répandre sur les côtés du récipient en raison de son point d'ébullition. Autoclaves devraient être fixés à 151 degrés C et ils doivent être exécutés pendant au moins 15 minutes à cette température.
Ethanol
Lorsque vous travaillez dans une zone stérile, toujours avoir une bouteille de 70 pour cent d'éthanol à portée de main pour désinfecter les surfaces de travail et de désinfecter les gants. Pour désinfecter un espace de travail, pulvériser la zone avec 70 pour cent d'éthanol et de l'essuyer avec un sans poussière lingette jetable. Pour stériliser les gants, vaporiser des gants que vous portez et frottez vos mains comme si vous les lavez. Laissez les gants sécher à l'air, mais ne soufflent pas sur eux. Haleine contient des contaminants. Pour accélérer le processus de séchage, vous pouvez tenir vos mains sur la prise d'air de l'armoire bio-sécurité vous travaillez sous.
Utilisez jetables
Chaque fois que vous pouvez, en utilisant du matériel jetable comme les boucles, les épandeurs, flacons et boîtes de Pétri rend la contamination d'une zone de travail stérile beaucoup moins probable, même si elle ne possède les inconvénients associés d'une plus grande dépense et plus la production de déchets.
Parlant
Bien qu'il soit souvent nécessaire d'expliquer une procédure ou d'enseigner à quelqu'un sur ce que vous faites lorsque vous travaillez sous une hotte, gardez la parole à un minimum. Si vous vous attendez à parler du tout, porter un masque facial. Essayez d'écrire ce que vous allez faire à l'avance afin que votre public peut suivre sans explications orales. Demander qu'ils économisent leurs questions pour après la procédure et suggèrent qu'ils écrivent des questions ou des commentaires qu'ils pensent pendant que vous travaillez.