Les scientifiques utilisent une électrophorèse sur gel de technique appelée pour déterminer la longueur des fragments d'ADN. Dans ce procédé, des échantillons inconnus et un étalon d'ADN sont placés dans des puits - petits trous - au niveau du bord d'un gel. La norme contient des fragments de dimensions connues, mesurées en paires de bases. Un courant électrique provoque des fragments d'ADN à migrer le long du gel, avec les molécules les plus courtes se déplaçant le plus loin. La distance parcourue par et la taille des fragments normalisés sont tracés sur du papier graphique semi-logarithmique. La longueur des fragments inconnus peut alors être calculé en comparant la distance parcourue sur le graphique.
Instructions
1 Obtenir une photographie d'un gel après électrophorèse sur gel. Les fragments d'ADN seront visibles sous forme de bandes dans les colonnes - connu sous le nom de voie.
2 Identifier la colonne qui contient la norme d'ADN. Cette molécule d'ADN a été coupé avec une enzyme pour produire des fragments de taille connue - ou poids moléculaire. Il devrait y avoir une bande correspondant à chaque fragment.
3 Étiqueter chaque fragment de l'étalon d'ADN avec sa taille, mesurée en paires de bases. Ces informations sont fournies soit par le matériel d'électrophorèse sur gel ou dans la littérature scientifique.
4 Mesurer la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN standard. Mesurer la distance entre la face avant du puits, - lorsque l'échantillon a été placé sur le gel - à l'avant de la bande d'échantillon formé sur le gel.
5 Entrez les données dans une table.
courbe standard
6 Obtenir un morceau de papier graphique semi-logarithmique sur lequel dessiner une courbe standard pour la norme de l'ADN. du papier semi-logarithmique comporte une échelle linéaire sur un axe et une échelle logarithmique sur l'autre axe. Cela vous permet de tracer le logarithme de la distance parcourue sans avoir à calculer.
7 Marquez l'axe des x avec la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN. L'échelle de l'axe des x doit être linéaire.
8 Marquez l'axe y avec la taille - en paires de bases - des fragments d'ADN. L'échelle de l'axe y doit être logarithmique.
9 Tracer la distance parcourue et la taille des fragments d'ADN standard sur le graphique.
dix Connecter les points de la ligne de meilleur ajustement pour créer une courbe standard. Ceci est appelé une courbe standard, mais la ligne doit être droite.
Fragments d'ADN inconnu
11 Mesurer la distance - en millimètres - parcourue par les fragments d'ADN inconnus.
12 Situer sur l'axe des abscisses du graphique de la distance parcourue par les fragments inconnus.
13 Tracez une ligne verticale de ce point sur l'axe des x à la courbe standard.
14 Tracez une ligne horizontale à partir du point d'intersection avec la courbe à l'axe-y. Ceci est la taille - en paires de bases - du fragment inconnu.