Le bromure d'éthidium
Pour cette technique de visualisation, le bromure d'éthidium est mélangée avec de la poudre d'agarose, un tampon EDTA et de l'eau pour former la matrice de gel avant l'électrophorèse. En conséquence, les molécules de bromure d'éthidium deviennent dispersées uniformément dans toute la matrice. Une fois que les puits du gel ont été remplis avec les échantillons d'ADN respectifs et des colorants de suivi, une tension est appliquée pour tirer lentement les grandes, les composés polaires à travers la matrice.
Pendant ce mouvement, les bases des molécules d'ADN se lient temporairement aux particules de bromure d'éthidium, en les faisant glisser le long. Par électrophorèse de temps est terminée, chaque molécule d'ADN a repris à l'importante quantité de bromure d'éthidium.
En présence de lumière ultraviolette, le bromure d'éthidium présente une fluorescence. Les techniciens brillent d'une lumière UV spécialement calibré à travers le gel alors qu'une machine capte l'image des fragments incandescents.
Bleu de méthylène
Si un transilluminateur UV ne sont pas disponibles ou pratique, les techniciens peuvent rendre l'ADN visible dans les conditions normales par trempage du gel d'agarose fini, avec de l'ADN electrophoresized à l'intérieur, dans une solution de bleu de méthylène pendant une nuit.
Un sel de chlorure avec un anion fortement hydrophobe, les molécules bleu de méthylène pénètrent dans la matrice du gel complet. Toutefois, la liaison hydrogène à travers l'ADN provoque les molécules de teinture à accumuler. Cette densité de tache accrue autour de l'ADN donne une teinte plus foncée de bleu, visible à l'œil nu.
Colorants de suivi
Au-delà de la taille relative des bandes d'ADN, les techniciens peuvent mesurer la taille absolue (en paires de bases) de chaque fragment en utilisant des produits chimiques appelés colorants de suivi. des colorants visibles sans l'addition de bromure de méthylène, le bleu ou éthidium, tels que le suivi de bromophénol bleu cyanol mouvement et le xylène à travers les matrices de gel d'aragose lors de l'électrophorèse à la même vitesse que les fragments d'ADN comprenant des nucléotides 300 et 4000 nucleotides, respectivement. Dans l'électrophorèse, les fragments d'ADN plus massives se déplacent à travers la matrice du gel à une vitesse plus lente que des fragments plus petits.
Par conséquent, tandis que le suivi des colorants ne pas influencer directement la visibilité des fragments d'ADN, en comparant la position d'un fragment d'ADN dans le gel à la position de ces colorants permettre aux techniciens de «voir» le nombre approximatif de nucleotides du fragment d'ADN contient.