La différence entre Northern blot et inverse Northern blot

January 14

La différence entre Northern blot et inverse Northern blot


Les gènes de l'ADN sont comme des recettes dans le code. Le processus qui transforme l'information codée dans un gène dans une protéine est appelée l'expression génique. Les biologistes doivent souvent déterminer si un gène est exprimé dans un type de tissu donné et le niveau d'expression. Deux techniques pour étudier l'expression des gènes sont Northern blot et inverse Northern blot.

transfert de Northern

Les biologistes commencent un transfert de Northern en isolant l'ARNm à partir d'un échantillon de tissu. La façon la plus commode de le faire est au moyen de la "queue poly-A," une chaîne de adénine (A) nucléotides à l'extrémité d'un transcrit d'ARNm, ce qui est une copie d'ARN du gène dans l'ADN. Une fois que le biologiste a isolé l'ARNm, elle peut le séparer sur la base de la taille par électrophorèse sur gel, puis le transférer à une membrane de nitrocellulose. Une sonde d'ADN simple brin est ajouté, et que la sonde elle-même ou "hybrident" attacher à une transcription d'ARN complémentaire. Parce que la sonde est marquée (soit avec un isotope radioactif ou une enzyme ci-jointe), le biologiste peut déterminer si la transcription de l'ARN d'intérêt est présent dans l'échantillon de tissu. Dans l'affirmative, cela signifie que le gène est exprimé.

Inverser Northern blot

Inverse Northern blot est basé sur les mêmes principes, mais il est un peu différent. La membrane a été traitée de sorte qu'elle contient une collection de fragments d'ADN; ces fragments d'ADN sont «ADNc» ou copies d'ADN de la transcription d'ARN. Lorsque le biologiste extrait l'ARN à partir du tissu, il est radioactivement marqué et mis en contact avec la membrane, où elle se coller ou "hybridation" correspondant à des fragments d'ADN. La présence de la sonde radioactive permet au biologiste de déterminer si la transcription de l'ARN pour le gène d'intérêt est présent dans l'échantillon de tissu.

comparaisons

Les deux Northern blot et inverser Northern blot sont des techniques d'analyse de l'expression des gènes, donc ils ont tous deux répondent le même genre de question, mais en utilisant une approche différente. Inverse Northern blot est plus utile dans les cas où la quantité d'ARN disponible est plus limité, car plus d'ARN est requis pour effectuer un transfert de Northern. Par conséquent, la Northern blot est moins faisable si seuls de petits échantillons sont disponibles.

Considérations

Les deux Northern blot et inverser Northern blot sont plus rarement utilisés de nos jours, en partie parce que des techniques plus efficaces pour l'analyse de l'expression génique sont devenus disponibles. Biopuces, par exemple, permettent aux biologistes d'analyser l'expression de nombreux gènes à la fois, plutôt que d'un seul gène à la fois. Northern Blot peut être utilisé en conjonction avec la transcription inverse PCR (RT-PCR) pour étudier l'expression génique de gènes uniques. RT-PCR est très sensible, il a trop déplacé inverse Northern blot dans la plupart des applications.