Matière organique végétale est composée de nombreuses cellules, dont chacune contient l'ADN qui contient les instructions pour la croissance et la fonction. Les scientifiques peuvent souhaiter étudier tout ou partie du matériel génétique présent dans les cellules et ont donc besoin d'extraire l'ADN en toute sécurité à partir du matériau structurel et de la machinerie de la cellule qui l'entoure.
Instructions
1 Remplir le bain-marie au niveau recommandé avec de l'eau, qui varie avec les caractéristiques de chaque fabricant, et allumez-le. Réglez le bain d'eau à 65 degrés Celsius et lui permettre de venir à la température. Placez le récipient d'isopropanol sur la glace. Réglez la centrifugeuse à 3000 tours par minute à une température de 20 degrés Celsius.
2 Peser 2 g de feuilles sur une balance et placez-les dans un mortier. Ajouter suffisamment de bêta-mercaptoéthanol par l'intermédiaire d'une pipette dans un récipient de tampon d'extraction de sorte que le produit final est constitué d'un à deux pour cent de bêta-mercaptoéthanol. Par exemple, si vous avez un volume de tampon qui mesure environ 100 ml, puis ajouter 2 ml de bêta-mercaptoéthanol au récipient et bien mélanger.
3 Pipette 7 ml de tampon d'extraction dans le mortier. Broyer le mélange dans un liquide homogène avec le pilon.
4 Pliez un morceau de gaze sur pour former quatre couches. Strain et presser le liquide à travers les couches dans un tube de centrifugeuse de 15 ml.
5 Placer le tube dans le bain-marie pendant 30à 60 min utes. Agiter le tube pour mélanger son contenu tous les quarts d'heure. Laisser refroidir le tube à température ambiante après la période à plein temps est écoulé.
6 Remplir le tube avec le chloroforme et le mélange isoamylique (il contient 24 parties de chloroforme à un isoamylique partiel), de sorte que le tube contient à peu près la moitié de l'échantillon et la moitié de la nouvelle addition de liquide. Boucher le tube et retournez-le à quelques reprises lentement pour les mélanges de fluides.
7 Placer le tube dans la centrifugeuse et le laisser tourner pendant 10 minutes.
8 Placer 50 ml de RNase A dans un nouveau tube de centrifugation. Pipeter le surnageant (la couche transparente à la partie supérieure du tube au-dessus d'une couche blanche de débris) dans le premier tube hors tension et le déplacer vers le second tube. Boucher le tube et inverser plusieurs fois pour mélanger le contenu ensemble. Garder le tube à la température ambiante pendant une heure.
9 Effectuer les étapes 6 et 7 encore deux fois de sorte que vous avez un tube d'échantillon clair. Puis la pipette jusqu'à 9 ml de liquide clair dans le tube final dans un nouveau tube. Ajouter 6 ml d'isopropanol et inverser les tubes 10 fois d'une manière douce de sorte l'ADN tombe hors de la solution et en une forme solide. Centrifuger le tube pendant 10 minutes, ce qui devrait créer une pastille d'ADN dans le fond du tube.
dix Verser le liquide dans le tube de sorte que la pastille reste. Pipette dans 2 ml de 70% d'éthanol et lieu de retour dans la centrifugeuse pendant cinq minutes. Verser la partie liquide à nouveau. Utiliser un embout de pipette stérile pour ramasser le culot et le déplacer vers un 1,5 ml tube stérile Eppendorf. Pipette dans 200 microlitres d'eau déminéralisée stérile et laisser l'ADN se dissoudre entièrement dans le liquide, ce qui peut prendre du jour au lendemain. L'échantillon est alors prêt pour l'analyse.