Étapes Gel Electrophoresis

November 10

Étapes Gel Electrophoresis


L'électrophorèse sur gel est un procédé utilisé pour mesurer le nombre ou la taille de l'ADN, l'ARN, des gènes et des protéines. Le gel est la matrice dans laquelle les échantillons se déplacent à travers et sont séparés en fonction de leur taille. Les petites tailles vont voyager plus loin alors que les grandes, des molécules plus denses ne feront que parcourir une courte distance. Cette technique est fréquemment utilisée comme une première étape dans de nombreuses expériences génétiques pour s'assurer que le produit souhaité est présent.

Instructions

1 Créez le gel en utilisant agar. Mélanger l'agar avec de l'eau et dissoudre l'agar par chauffage. La quantité d'agar et de l'eau dont vous avez besoin variera alors assurez-vous de suivre ce qui est recommandé sur la bouteille d'agar. Insérer le peigne d'électrophorèse dans le moule de gel. Le peigne crée les puits où l'échantillon est placé. Verser la gélose chaud dans le moule et laisser l'agar refroidir. Il va se solidifier quand il fait froid. Retirer le peigne de gel du moule.

2 Dessinez un petit diagramme du gel et de l'étiquette échantillon qui ira dans chaque puits. Ceci est très important que les gels peuvent contenir un grand nombre de puits et vous ne me souviens pas quel échantillon a été chargé dans chaque puits. Vous devez tenir un registre.

3 Placer le gel froid sur une surface sombre car cela rend plus simple pour charger les échantillons dans le puits. Il est recommandé que vous seuls les échantillons de charge dans tous les autres ainsi que ce qui empêche tout chevauchement ou un saignement dans le gel. En utilisant une pipette, mélanger chaque échantillon avec une petite quantité de colorant. La plupart du temps ce colorant contiendra le bromure d'éthidium, une substance toxique. Porter des gants lors du mélange des échantillons. Soyez prudent lors du chargement des échantillons dans les puits. Si vous appuyez sur la pointe de la pipette trop loin, il ira dans le gel qui ruine le gel. Vous aurez besoin de faire un nouveau gel si cela se produit.

4 Placer le gel avec les échantillons placés dans la chambre d'électrophorèse. Le côté avec les échantillons doit être orienté de sorte qu'ils soient le plus proche du noir, ou négatif, terminal.

5 Mélanger ensemble une solution de sel en utilisant du chlorure de sodium et de l'eau distillée. Verser cette solution saline dans chaque côté de la chambre jusqu'à ce que le niveau d'eau ne couvre que la partie supérieure du gel. Il est préférable de verser la solution de sel dans les puits d'abord sur les deux faces contenant le gel. Ensuite, verser la solution sur le côté opposé de l'échantillon pour couvrir le gel. Cela réduit toute diffusion possible de l'échantillon pendant le remplissage.

6 Mettez le couvercle d'électrophorèse sur la chambre et le fil rouge à la borne positive de la chambre et le fil noir à la borne négative. Allumer la source d'alimentation, en veillant à ce que la tension est comprise entre 50 et 100 volts. Laisser le gel pendant environ 10 minutes. Vous verrez les échantillons de séparation comme ils courent à travers le gel.

7 Mettez de la source d'alimentation et retirez le couvercle d'électrophorèse. Retirer le gel et le placer dans un transilluminateur. Le transilluminateur est une boîte à lumière ultraviolette. Prenez une photo du gel. Le bromure d'éthidium va fluorescence et vous pouvez voir les différentes bandes d'ADN. Imprimer une photo de votre gel si vous le pouvez.