dimères Primer sont un obstacle frustrant de rencontrer lors de l'exécution des réactions en chaîne de la polymérase, ou PCR. Elles se produisent lorsque les extrémités des amorces sont complémentaires, ce qui induit la liaison. Les amorces liées se présentent sous forme de bandes courtes de la longueur des amorces utilisées dans un gel d'agarose. Il existe quelques méthodes simples que vous pouvez utiliser pour débarrasser votre expérience de dimères d'amorces avant de recourir à une refonte primaire complète.
Instructions
Dépannage Protocole
1 Utiliser une plus faible concentration de l'amorce. Essayez une dilution 1:10 de ce qu'on appelle par votre procédure.
2 Augmenter la température de recuit pour votre procédure. Déplacer la température à 5 ° C en dessous de la température de fusion de la plus petite amorce.
3 Ajouter du diméthylsulfoxyde (DMSO) jusqu'à 5 pour cent du volume réactionnel. Cela permettra d'améliorer la spécificité de la matrice d'ADN pour les amorces, contribuant ainsi à diminuer l'occurrence de dimères.
4 Utilisez un kit de démarrage à chaud PCR afin de maximiser la spécificité, si les étapes simples ci-dessus sont pas efficaces. Suivez attentivement les instructions fournies avec votre kit.
5 Aller à la dernière station. Redessiner les amorces pour faire en sorte que les extrémités ne sont pas complémentaires.