Dans un dosage immunologique de la capacité de liaison dans un récipient ou dans les puits de la microplaque est supérieure à la quantité de protéine placée dans le récipient ou puits. Pour diminuer ou empêcher des anticorps ou d'autres types de protéines et de molécules d'absorber au récipient ou puits, le dosage doit être lavé avec le tampon approprié et un réactif de blocage spécifique doit être ajouté. Le type de tampon et le réactif bloquant choisi dépend du type d'essai expérimental.
Instructions
1 Enrober les puits de la plaque avec l'antigène. Utiliser une dilution de l'antigène. des solutions pures de l'antigène ne sont pas nécessaires étant donné que seulement environ 3 pour cent de la protéine dans l'échantillon est la protéine cible. Lors de la dilution, faire en sorte que les échantillons contiennent l'antigène à une concentration qui se situe dans la plage de détection de l'anticorps. Pipeter la solution de dilution de l'antigène en bas des puits de la plaque. Certaines plaques peuvent être pré-revêtues avec l'antigène. Lisez les instructions fournies avec les puits de la plaque.
2 Couvrir les plaques avec un plastique adhésif et incuber pendant une nuit. Laver les plaques avec des solutions tampons, telles que du tampon Tris salin ou du sérum physiologique tamponné avec un phosphate. Pour laver, rincer les plaques en utilisant un flacon souple rempli de la solution tampon sur un évier de laboratoire. Pat les plaques avec une serviette en papier pour enlever les gouttes restantes de solution tampon.
3 Réduire la liaison non spécifique des protéines et des molécules à l'aide d'un tampon de blocage ou d'un réactif, tel qu'un bloqueur de détergent, du lait en poudre ou du sérum bovin. Le type de réactif de blocage utilisé dépendra du dosage. Ajouter le réactif de blocage dans les puits en utilisant une pipette. Couvrir la plaque à nouveau avec de la colle plastique et incuber pendant la nuit.
4 Re-nettoyer les puits de la plaque à nouveau en utilisant une solution tampon. Ces étapes vont diminuer la quantité de liaison non spécifique qui peut se produire dans les puits de la plaque avant d'ajouter la solution d'anticorps nécessaire pour la procédure. En outre, les réactifs de blocage peuvent aider à réduire les couleurs de fond dans les résultats des essais.