Comment assembler Vertical Electrophoresis

April 12

L'électrophorèse sur gel est utilisée pour séparer des protéines ou des acides nucléiques. Des systèmes d'électrophorèse verticale sont utilisés pour séparer les protéines par transfert de Western ou pour la séparation de petites quantités d'ADN, par exemple, après réaction en chaîne par polymérase. La protéine ou le mouvement d'acide nucléique à travers le gel en réponse à un courant électrique et sont séparés selon leur taille. Le pourcentage de gel utilisé détermine la résolution en raison de la taille des pores et la plus petite taille de la protéine plus le pourcentage d'acrylamide.

Instructions

1 Sélectionner des plaques de verre et les éléments d'espacement et de placer les éléments d'espacement entre les deux plaques de verre, avec les plus courtes des plaques de verre à l'avant. Pince dans la cage pour permettre la coulée du mélange de gel.

2 Compenser le mélange de type gel pour le pourcentage requis, qui dépend de la taille de la protéine à l'étude. Verser le mélange entre deux plaques de verre en évitant les bulles; insérer délicatement le peigne, qui permettra de créer des puits pour les échantillons. Laisser durcir.

3 Inventez un tampon de fonctionnement approprié. Retirer les plaques de verre de la cage et la pince dans un appareil d'électrophorèse, dans les cassettes. Placer dans le réservoir d'électrophorèse et d'ajouter un tampon à réservoir externe et interne.

4 Préparer des échantillons avec le tampon de chargement et, si nécessaire, dénaturer par chauffage d'un échantillon et en ajoutant des agents dénaturants. Retirer le peigne et avec soin de placer l'échantillon avec le tampon de chargement dans les puits. Laissez bien pour les marqueurs moléculaires et contrôle positif. Branchez le bloc de couvercle et de la puissance et exécuter selon les instructions de bloc d'alimentation.