CLHP, également appelée haute performance chromatographie liquide ou chromatographie liquide à haute pression, est un outil utilisé pour l'identification, la quantification, la séparation et la purification de composés chimiques. Il est couramment utilisé dans les laboratoires de fabrication de produits alimentaires, pharmaceutiques, minières et médicales pour le contrôle de la qualité et de la recherche. Pour utiliser une HPLC correctement, il est important de comprendre la fonction et le but de ses composants de base.
Phase mobile
La phase mobile est composée d'un ou plusieurs réactifs qui circulent à travers la HPLC à un débit prédéfini et un rapport. Les réactifs sont stockés dans des réservoirs mobiles de phase et étirés à travers un tube par la pompe. En fonction de la nature des échantillons, une phase mobile isocratique ou un gradient peut être utilisé. Une phase isocratique maintient une concentration en solvant cohérente dans l'analyse et nécessite un réservoir de solution. Une élution de gradient varie la concentration de la phase mobile selon un calendrier prédéfini.
Injecteur
L'injecteur tire un volume prédéterminé de liquide à partir de la fiole d'échantillon et l'injecte dans la phase mobile circulant à travers le système. Selon la réaction chimique nécessaire et la quantité d'échantillons disponibles, les volumes d'injection sont généralement comprises entre 10 et 50 ml. La plupart des HPLC modernes sont équipées d'un injecteur automatique situé dans une enceinte à température contrôlée.
Pompe
La pompe est chargé de faire circuler la phase mobile et l'échantillon à travers le système HPLC. Il fonctionne à une vitesse prédéfinie qui détermine la pression du système. Différents types de pompes peuvent être utilisées, avec la majorité de pompage à des pressions sous 400 bars. pièces importantes de la pompe comprennent le moteur, le piston, le joint, clapets et purger les vannes de solvant pour les déchets directs.
Colonne
La colonne est la phase stationnaire de la HPLC. Il est responsable de la séparation des molécules individuelles dans chaque échantillon avant qu'ils ne soient caractérisés par le détecteur. La colonne est garnie d'un matériau qui est conçu pour interagir sélectivement avec des molécules spécifiques. Le temps de rétention des molécules de la phase stationnaire est fonction de leur affinité pour le stationnaire par rapport à celle des phases mobiles. En fonction de l'analyse, des colonnes en phase inverse ou en phase normale peuvent être utilisés.
Détecteur
Le détecteur est le composant qui identifie le profil d'absorbance ou de fluorescence de chaque molécule circulant à travers le système. Selon les molécules en cours d'analyse, les rayons ultraviolets, visibles ou des détecteurs de fluorescence peuvent être utilisés. La longueur d'onde de détection est réglée avant l'analyse et les données résultantes utilisé pour créer un profil spectral pour chaque produit chimique détectée.
Chromatogramme
Le chromatogramme est une représentation graphique des données recueillies par le détecteur. L'axe des ordonnées représente la capacité d'absorption ou d'émission, tandis que l'abscisse représente le temps de rétention. «Pics» dans le chromatogramme, représente une ou plusieurs molécules au sein de l'échantillon. information sur l'échantillon est identifié sur la base des zones de pointe et des temps de rétention.