Densité optique - une mesure de l'étendue à laquelle une substance transmet de la lumière - est souvent utilisé pour mesurer la concentration des cellules ou des particules qui sont dispersées, mais ne se dissout pas dans un fluide. La densité optique corrigée de ce type de mélange, connu sous le nom d'une suspension, est directement proportionnelle à la concentration, la densité ou du nombre de cellules dispersées dedans.
Loi de Beer-Lambert
La loi de Beer-Lambert, ce qui indique que l'absorbance est proportionnelle à ou présente une relation linéaire avec la concentration de l'espèce absorbante est vrai que pour des densités optiques inférieures à 0,4. Cependant, les échantillons ayant une densité optique supérieure à 0,4 peuvent être dilués par un facteur de dilution définie et leurs densités optiques mesurées. Si les valeurs mesurées sont divisées par le facteur de dilution pour produire la densité optique corrigée, cette nouvelle valeur est proportionnelle au nombre de cellules dans l'échantillon.
spectrophotomètre
La densité optique est mesurée par un instrument connu sous le nom d'un spectrophotomètre, qui compare la luminosité de la lumière émise à partir de deux sources, dont l'un présente certaines caractéristiques standard. Lorsque la lumière passe à travers une suspension cellulaire, la lumière est dispersée par les cellules de sorte que moins de celui-ci atteint une cellule photoélectrique - un dispositif électronique dont la sortie électrique varie en fonction de l'intensité de la lumière tombant sur elle - à l'intérieur du spectrophotomètre. Ainsi, plus le nombre de cellules dans la suspension le plus faible de la sortie électrique de la cellule photo-électrique et vice versa.
Correction de la densité optique
A des densités optiques supérieures à 0,4, les degrés auxquels les cellules peuvent être ombrées par d'autres cellules ou reflètent la lumière de nombreuses fois est appréciable. A des densités optiques élevées, la densité optique non corrigée de suspensions cellulaires est plus directement proportionnelle au nombre de cellules. Toutefois, la densité optique non corrigée des suspensions cellulaires diluées est à peu près proportionnelle à leurs densités relatives connues de façon précise - le rapport de leurs densités à celle d'une substance de référence, tel que l'eau - de sorte qu'il existe une hypothèse de travail raisonnable que la densité optique non corrigée d'une suspension de cellules hautement diluée est, en fait, sa densité réelle optique.
Densité optique par rapport
En multipliant la valeur de la densité relative de chaque suspension cellulaire de la valeur de densité optique de base obtenue à partir de la suspension cellulaire très diluée, il est possible d'obtenir la densité optique corrigée. Cependant, pour rendre la mesure aussi précise que possible, la valeur optique de base de densité doit être obtenue à partir de plusieurs lectures du spectrophotomètre.