Spectrophotométrie est une technique d'analyse utilisée dans la chimie pour déterminer la concentration d'un analyte en solution. La loi de Beer-Lambert régit spectrophotométrie. Cette loi définit la relation entre l'absorbance et la longueur d'onde d'observation. Chaque longueur d'onde utilisée pour la mesure d'une solution possède une absorptivité molaire spécifique pour l'intérêt composé. Vous pouvez déterminer la valeur spécifique de l'absorptivité en utilisant une solution de concentration connue et la loi de Beer-Lambert.
Instructions
1 Allumez le spectrophotomètre et le laisser se réchauffer pendant au moins 15 minutes. Ceci permet de stabiliser la lampe et l'instrument pour parvenir à un état d'équilibre.
2 Remplir une cuvette avec une solution de blanc qui est la même que celle de la solution étalon. À l'aide d'une ébauche ayant la même matrice que l'échantillon permettra d'éliminer toute absorption de la matrice de projection dans le signal analytique.
3 Régler la longueur d'onde d'observation. Parce que l'absorptivité molaire varie avec la longueur d'onde, le réglage de la longueur d'onde de fonctionnement sur le spectrophotomètre permet la collecte des données nécessaires au calcul de l'absorptivité molaire.
4 Placez la cuvette vierge dans le spectrophotomètre et prendre une lecture de l'absorbance à la longueur d'onde en question.
5 Répéter le processus avec une solution de concentration connue et enregistrer la densité optique associée à la concentration à la longueur d'onde d'intérêt spécifique.
6 Branchez les valeurs obtenues lors de l'expérience dans la loi de Beer-Lambert. La loi de Beer-Lambert: A = a b c, où A est l'absorbance, b est la longueur du trajet et c est la concentration. Réorganiser la loi à résoudre pour l'absorptivité molaire, a. Spectrophotomètres standard utilisent une longueur de trajet de 1 cm, donc a = A / b c. A titre d'exemple, supposons qu'une solution de CuSO4 à une concentration de 0,0125 M donne une absorbance de 0,5 unités d'absorbance (AUS). Absorptivité Molar à longueur d' onde = 0,5 / 1 0,0125 = 0,5 / 0,0125 = 40 litres / mole * cm.