Comment faire pour utiliser la réaction de la colline pour mesurer Photosynthèse

March 16

Comment faire pour utiliser la réaction de la colline pour mesurer Photosynthèse


Les plantes utilisent la lumière solaire pour convertir le dioxyde de carbone dans les aliments à travers le processus de la photosynthèse. La réaction Hill est la partie du processus dans lequel les électrons du mouvement de l'eau à un accepteur d'électrons. Vous pouvez mesurer cette réaction dans le laboratoire en utilisant un accepteur d'électrons artificiel et chloroplastes isolés.

Instructions

Faire la suspension chloroplaste

1 Peser cinq feuilles d'épinards. Ajouter ou enlever les feuilles pour obtenir un poids total d'environ 4 g.

2 Dés les feuilles d'épinards avec des ciseaux. Placez les feuilles coupées en dés dans un bloc de mortier frais. Ajouter 15 ml de solution Tris-NaCl et une pincée de sable. Broyer la solution avec un pilon pendant environ 2 minutes.

3 Filtrer la solution à travers une étamine dans un tube de 15 ml de centrifugeuse réfrigérée, et exécuter la centrifugeuse à 200 G pendant 1 minute.

4 Décanter la partie liquide de la solution, appelée le surnageant dans un tube de centrifugeuse réfrigérée. Spin à 1300 G pendant 5 minutes.

5 Jeter le surnageant. Ajouter 10 ml de Tris-NaCl. Resuspendre la solution en le tirant dans une pipette Pasteur et le laisser tomber dans le tube de centrifugeuse.

6 Transfert 4 ml de la solution dans un tube à essai propre, réfrigérés. Couvrir avec un film auto-obturant et mélanger par inversion.

7 Gardez la suspension chloroplaste sur la glace lorsqu'ils ne sont pas en cours d'utilisation.

Mesure de la réaction de Hill

8 Réglez le spectrophotomètre pour prendre des lectures à 600 nanomètres (nm), et laissez-le chauffer pendant 5 minutes.

9 Mettre 3,5 ml de solution Tris-NaCl dans un tube à essai et mélanger avec 0,5 ml d'eau et 0,5 ml de la suspension de chloroplastes, selon une expérience préparée par Weber State University professeur de zoologie Jon Clark, basé sur le manuel "Les enquêtes de laboratoire dans la cellule et de biologie moléculaire. " Envelopper le tube à essai avec du papier. Après 10 minutes, prendre une lecture d'absorbance avec le spectrophotomètre en nanomètres et écrire.

dix Mettre 3,5 ml d'une solution de Tris-NaCl dans un autre tube à essai et 0,5 ml de DCIP (un accepteur d'électrons artificiels), 0,5 ml d'eau et 0,5 ml de la suspension de chloroplastes. enregistrer immédiatement une lecture de spectrophotomètre. Placer le tube dans un rack tube à essai, allumer la lumière, et les lectures fiche spectrophotomètre chaque minute pour un total de 10 minutes.

11 Soustraire la valeur d'absorbance à la dernière minute de la valeur d'absorbance initiale pour chaque tube. Le résultat est le delta Une valeur, la variation de la lecture au fil du temps. Pour le deuxième tube à essai, soustraire l'absorbance à chaque minute de la première lecture d'absorbance. Enregistrez ces valeurs delta A sur un tableau distinct.

12 Terrain delta A au fil du temps sur un graphique pour les deux tubes. Utilisez le temps en secondes que le X ou axe horizontal et delta A en nanomètres que Y ou axe vertical. Connecter les points de début et de fin pour chaque tube. La forme de la courbe du second tube de test est la mesure de la réaction de Hill en nanomètres par seconde (nm / s).

Conseils et avertissements

  • Faites l'expérience dans une chambre semidark pour limiter les effets de la lumière ambiante.
  • Prenez les lectures aussi rapidement que possible pour une plus grande précision.
  • Ne pas préparer un tube jusqu'à ce que vous êtes prêt à prendre une lecture.
  • Vous pouvez ajouter des inhibiteurs tels que le 3- (3, 4-dichlorophényl) -1, 1 diméthylurée (DCMU) ou de l'ammoniac à la solution de chloroplaste dans un autre tube à essai pour voir comment ils affectent le taux de la réaction Hill.