Les biologistes ont souvent besoin de séparer les protéines et les acides nucléiques (ADN et ARN) sur la base de la taille ou de la charge, à l'aide d'une technique appelée électrophorèse sur gel. Par la suite, les biologistes peuvent transférer l'échantillon à partir du gel sur une membrane pour l'identification. Ceci est connu sous électrotransfert.
gel Electrophoresis
Dans l'électrophorèse sur gel, un champ électrique provoque des protéines ou des fragments d'ADN pour voyager à travers une plaque de gel. fragments ou protéines plus petits se déplacent plus rapidement que les plus grands.
Une fois que les protéines ou fragments sont séparés, les biologistes peuvent les transférer à une membrane et soit colorent eux, ou utilisent des anticorps pour identifier des protéines spécifiques.
électrotransfert
Bien que le protocole exact varie électrotransfert comprend généralement les étapes suivantes.
Après électrophorèse, les chercheurs placent la plaque de gel au-dessus de plusieurs feuilles de papier filtre et une éponge immergée dans une solution tampon de transfert. Ils placent alors une membrane de nitrocellulose ou PVDF sur le gel et le couvrir avec plus de papier filtre.
L'application d'un champ électrique provoque des fragments ou des protéines chargées négativement à migrer vers le haut à partir du gel à la membrane. À ce stade, les chercheurs peuvent enlever et sonder la membrane.
Considérations
Lorsque marcottage la membrane et le gel pour électrotransfert, il est important d'éliminer les bulles d'air, car ils pourraient empêcher la migration des protéines ou des acides nucléiques.
Electrophorèse suivie par électrotransfert est généralement un préalable à l'Ouest, du Nord et du Sud blot, qui permet d'identifier / fragments d'ARN ADN spécifiques ou des protéines.