Western blot est une technique utilisée en biochimie pour détecter les types de protéines dans un échantillon. Les protéines sont séparées par électrophorèse sur gel et transférés sur une membrane, où il est sondé avec des anticorps. Les anticorps se fixent aux protéines sur la membrane. Une substance fluorescente est ensuite ajouté à la membrane, qui réagit avec les anticorps tels que les protéines sont visibles après l'exposition au film.
Instructions
1 Lavez vos mains et de mettre sur latex ou en nitrile.
2 Retirer le tissu cellulaire de la chambre d'incubation. Placer environ 1 gramme de tissu dans un mortier. Ajouter suffisamment d'azote liquide au mortier pour couvrir le tissu. Broyer le tissu congelé avec le pilon jusqu'à ce qu'il soit une poudre.
3 Ajouter la poudre dans un tube à essai. Ajouter 10 ml de tampon de lyse dans le tube d'essai. Utilisez un polytron en 20 secondes rafales jusqu'à ce que la poudre et le liquide sont homogènes.
4 Boucher le tube à essai et le placer dans une centrifugeuse. Exécutez la centrifugeuse à une force centrifuge de 500 à 4 degrés Celsius pendant 15 minutes. Éliminer le liquide dans la partie supérieure du tube avec une pipette et le jeter.
5 Ajouter 5 ml de tampon de lyse au culot dans le tube à essai pendant 20 secondes. Centrifuger le tube pour le même temps et à la même température et de la force que dans l'étape 4. Retirer le liquide à la partie supérieure du tube d'essai. Ajouter 5 millilitres plus tampon de lyse et répéter l'étape de centrifugation.
6 Ajouter un tampon de remise en suspension suffisante pour le tube à essai pour couvrir la pastille. Agiter le tube à essai doucement pour mélanger le culot et le tampon. Verser le liquide dans des tubes Eppendorf et congeler les échantillons à une valeur négative de 80 degrés Celsius.
Conseils et avertissements
- Évitez cycles répétés de gel-dégel de vos échantillons, car il peut endommager les protéines.