chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) est un moyen commun d'analyse chimique instrumentale. Une composante essentielle de toute méthode HPLC est le solvant particulier de la phase mobile utilisée pour dissoudre et transporter les produits chimiques de l'analyte. Beaucoup de phases mobiles sont tamponnés pour contrôler les changements de pH et de veiller à ce que la méthode d'essai produit des résultats exacts et précis.
tampons
Un tampon est une solution dans un solvant spécialement formulé qui présente que de faibles variations du pH lorsqu'on utilise des acides forts ou des bases y sont ajoutés. Les tampons sont préparés par dissolution d'une base faible et de son acide conjugué, ou un acide faible et sa base conjuguée dans un solvant. Lorsqu'on utilise des acides ou des bases sont ajoutées à un tampon, de l'équilibre acido-basique existant déjà dans la solution compense automatiquement l'addition, avec le résultat qu'il y a relativement peu de changement dans le pH de la solution.
Buffer et ionisables composés chimiques
HPLC peut être utilisée pour analyser des composés chimiques ionisables. Ce sont des composés qui peuvent facilement former des ions en solution, tels que des acides carboxyliques. D'une manière générale, de tels composés doivent être analysés dans leur état non ionisé, où ils présentent un comportement constant en fonction de leur solubilité et les interactions avec les matériaux de garnissage de colonne HPLC. Tampons permettent la phase pH mobile pour être "verrouillé" dans une certaine gamme spécifique où les espèces d'intérêt est connu pour être dans son état non ionisé. En outre, les tampons résistent changements locaux dans pH causés par les composés eux-mêmes.
Général Buffer Utilisation
Tampons devraient être utilisés chaque fois qu'une espèce ionisable est l'analyte. Ceux-ci comprennent des acides organiques tels que l'acide sorbique et l'acide benzoïque. Les bases organiques contenant des groupes fonctionnels amines doivent également être analysées en utilisant des phases mobiles tamponnées. Des exemples de telles bases organiques comprennent la nicotine et de la méthamphétamine. phases mobiles tamponnées peuvent également être utilisés lors de l'analyse des composés non ionisables afin de forcer les contaminants soit dans leur forme ionisée ou non ionisée, au besoin, pour assurer qu'ils ne nuisent pas à l'analyse des espèces d'intérêt.
Phases Buffered mobiles communs
En général, la constante de dissociation acide pKa de l'espèce de tampon doit être proche du pH désiré pour le tampon. De plus, la phase mobile doit généralement être d'au moins la moitié de l'eau pour une utilisation avec des espèces tampons inorganiques. Pour les faibles valeurs de pH au voisinage de 2 à 3, le système de mémoire tampon le plus courant consiste en des sels de sodium ou de potassium de l'acide phosphorique. Si un tampon volatil est nécessaire, l'acétate ou le formiate peuvent être utilisés. Une plage typique pour la concentration d'espèces de tampon est de 10 à 50 millimoles par litre.