Comment faire une coloration de Gram

August 7

La coloration de Gram est une procédure couramment utilisée en biologie et en médecine pour aider à différencier les bactéries Gram-positives et des bactéries Gram-négatives. Voici comment faire une coloration de Gram.

Instructions

1 Placer un échantillon d'une culture bactérienne sur une lame de microscope. Une boucle d'inoculation peut être utilisé pour transférer les bactéries de la diapositive.

2 Utilisez un bâton de bois pour étaler la culture bactérienne sur la lame de microscope. Vous voulez avoir une couche fine et homogène de la culture sur la diapositive.

3 Sécher la diapositive contenant la culture bactérienne. Cela se fait souvent en maintenant la glisser sur une petite flamme d'un brûleur Bunsen.

4 Verser le cristal violet tache sur l'échantillon de bactéries sur la diapositive. Laissez le stand de toboggan pour environ 10 à 60 secondes en fonction de l'épaisseur du frottis sur la diapositive. Rincer la tache de cristal violet au large de la lame avec de l'eau.

5 Placez la solution d'iode de Gram sur le frottis bactérien. Laissez le frottis reposer pendant encore 10 à 60 secondes selon l'épaisseur du frottis. Rincer la solution d'iode de Gram supplémentaire avec plus d'eau.

6 Ajouter quelques gouttes d'un décolorant au frottis bactérien sur la diapositive. Décolorants qui sont souvent utilisés sont soit l'acétone ou l'alcool. Rincer le décolorant hors de la glissière lorsque le décolorant est plus coloré par les taches précédentes en tant que décolorant ruisselle de la diapositive. Un temps typique pour c'est d'environ 5 secondes.

7 Mettez un de contraste, comme une solution de fuchsine basique ou safranine, sur la diapositive sur le frottis bactérien. Laisser le reste de contraste sur le frottis pendant environ 40 à 60 secondes, puis rincer la contre-coloration avec de l'eau. Laisser la lame sécher à l'air.

8 Utilisez un microscope pour examiner la diapositive contenant le frottis bactérien. Les bactéries Gram-positives seront de couleur pourpre, et les bactéries Gram-négatives ont une couleur rouge ou rose.

Conseils et avertissements

  • Suivez toutes les normes de sécurité en laboratoire quand on travaille avec des solutions chimiques, les bactéries spécimens et le feu.