Comment faire un tampon de transfert Bis-Tris

June 11

Comment faire un tampon de transfert Bis-Tris


Le couplage du bis-tris en biochimie est important en raison de sa capacité à agir comme un zwitterion, possédant un ion positif et négatif sur la molécule. Elle peut servir de tampon dans la région de pH 7,6. Il est ajouté aux gels utilisés dans l'électrophorèse pour aider à maintenir les molécules en solution et les aides à la séparation des molécules. tampons de transfert supprimer des molécules à partir des plaques de gel d'analyse par électrophorèse et les transférer sur des membranes pour western blot. Chaque fabricant de rapports d'équipement d'électrophorèse légèrement différentes recettes pour la fabrication d'un tampon de transfert, mais ce qui suit est pour le tampon de transfert utilisé avec des systèmes de NuPAGE sur des échantillons non réduits.

Instructions

1 Préparer les ingrédients pour le tampon en pesant les quantités de chaque composant sur une balance analytique. Les trois composants secs pour un tampon de transfert est bicine, bis-tris et de l'EDTA. Poids à 4,08 bicine g, 5,23 g de bis-tris et 0,29 g d'EDTA sur des papiers de pesage individuels.

2 Ajouter ces composants à un bécher de 250 ml. Dissoudre ces composants avec 100 ml de méthanol. Remuer jusqu'à ce que les solides se dissolvent.

3 Transférez les composants dissous dans un flacon de 100 ml et laver bécher avec de l'eau ultrapure pour assurer le transfert de tous les composants.

4 Remplir le reste du volume de 1 litre avec de l'eau ultrapure. Ajouter l'eau dans les parties qui permettent un mélange suffisant entre chaque addition. Bien mélanger le contenu pour obtenir une concentration uniforme.