À de faibles concentrations, le sel peut aider à stabiliser les protéines en solution et améliorer ainsi leur solubilité. A des concentrations supérieures, cependant, le sel réduit la quantité d'eau disponible pour hydrater les protéines et, au-delà d'un certain seuil, les protéines commencent à précipiter. L'ajout de sel pour éliminer les protéines de la solution est parfois appelée «relargage».
Solubilité
Certaines protéines sont plus que d'autres solubles dans l'eau. Si une protéine a plus hydrophile ( «aimant l'eau») régions, il sera plus soluble que celui qui est plus hydrophobe ( "l'eau craignant"). Comme la concentration en sel augmente, les protéines hydrophobes moins solubles et plus précipitent en premier. les protéines étroitement apparentées ne peuvent pas être séparés par relargage, parce qu'ils vont précipiter à peu près la même concentration de sel, mais des protéines qui ont des structures très différentes et les caractéristiques peuvent souvent être séparées de cette façon.
Sels
Le sulfate d'ammonium est le sel le plus populaire pour cette procédure, car il a une très grande solubilité dans l'eau, même à très basse température. En général, vous voulez garder votre solution froide pour inhiber l'activité des protéases, des protéines qui Hacher d'autres protéines. La concentration en sel est généralement décrite par le pourcentage de saturation, où 25 pour cent à 25 pour cent de saturation (la concentration à laquelle on ne peut dissoudre le sel).
centrifugation
Typiquement, le sel est ajouté progressivement à la solution de protéines tout en agitant rapidement (d'une agitation magnétique est très utile pour ce type de procédure). On centrifuge la solution, ce qui provoque une partie des protéines à précipiter. Souvent, cette procédure sera divisée en plusieurs étapes. Vous pourriez, par exemple, commencer avec 25 pour cent de saturation (25 pour cent coupe), puis aller à un 75 pour cent coupe. Ce processus permet de diviser les protéines en trois groupes - ceux qui précipitent à 25 pour cent, ceux qui précipitent à 75 pour cent et ceux qui précipitent entre les deux.
Considérations
Relargage entraînera une certaine perte de la protéine que vous voulez isoler. Chaque protéine a sa propre courbe de solubilité - la solubilité de la protéine en fonction de la concentration en soluté ( "force ionique"). Par conséquent, même si la concentration en sel accrue est insuffisante pour précipiter la totalité de la protéine d'intérêt, il peut tout de même précipiter une partie de celui-ci. En outre, vous ne pouvez pas utiliser relargage pour isoler une protéine spécifique, parce que d'autres protéines précipitent avec elle. En règle générale, le relargage est la première étape dans un procédé de purification des protéines.