La lactoferrine est produite par les glandes exocrines et se retrouve dans le plasma sanguin et le lait des mammifères. En transferrine glycoprotéine il se lie et transporte le fer. Lorsque blessure ou de maladie provoque une inflammation, les niveaux d'augmentation de la lactoferrine. Son rôle dans le système immunitaire est en cours d'étude. Lactoferrine est représenté à agir comme un agent antibactérien et empêche la croissance des virus et des parasites. Des études montrent également la capacité de la lactoferrine à ralentir la croissance tumorale et l'aide au développement osseux. En raison de son potentiel, l'extraction de la lactoferrine à partir de fluides biologiques est important pour de nombreux domaines de recherche.
Instructions
1 Filtrer le lactosérum ou du lait à travers un papier filtre grossier pour éliminer les solides et la majorité des micro-organismes encore présents. Même pour une filtration plus fine en utilisant un système de microfiltration avec un papier filtre à pores de dimensions 300 micromètres.
2 Configurez votre pompe HPLC avec un 5 à 10 centimètres de long colonne. La colonne optimale pour ce processus contient SP Sepharose Big Beads. Ces colonnes sont disponibles auprès de GE Healthcare. Placer une collection de gobelet à l'extrémité libre de la colonne.
3 Injecter le lait filtré ou lactosérum dans la pompe en utilisant la seringue d'injection ou l'échantillonneur automatique de votre pompe. Injecter environ 100 volumes de colonne de lait ou 300 volumes de colonne de lactosérum dans la colonne. (Volume de colonne est la quantité de liquide de la colonne tiendra; vérifier votre colonne spécifique pour ce volume.)
4 Injecter le tampon phosphate faible de sel (au moins 0,7 molaire de chlorure de sodium) dans la colonne. L'éluat (le liquide qui est expulsé hors de la colonne) contiendra lactoferrine. Vous pouvez répéter les étapes 3 et 4 jusqu'à ce que la colonne est bouché (vous serez incapable de forcer un liquide à travers).
5 Dessaler l'éluat que vous avez recueillies. Cela peut être fait par échange d'ions, électrodialyse ou ultrafiltration, selon le plus pratique pour votre laboratoire. La méthode optimale est par ultrafiltration.
6 Séchez vos éluer. Le résultat sera lactoferrine. La lyophilisation est la méthode optimale pour le séchage, mais le séchage sous vide et le travail de séchage par atomisation et en fonction de l'équipement de votre laboratoire dispose.
Conseils et avertissements
- Il existe d'autres méthodes d'extraction de la lactoferrine, mais cette méthode a été trouvé efficace pour l'extraction du lait.
- Les premières fois que vous essayez cela, vous devriez avoir un échantillon de lactoferrine acheté à portée de main. Vous pouvez alors faire des normes de votre extraction et de la lactoferrine acheté et de les analyser sur une HPLC pour tester le vôtre pour la pureté.