Spectrophotométrie est une technique de laboratoire commun pour la détermination de la concentration du soluté dans une solution. Un spectrophotomètre utilise un prisme ou réseau de diffraction pour sélectionner la lumière d'une longueur d'onde souhaitée et le passer à travers l'échantillon de test. Un détecteur de l'autre côté mesure l'intensité de la lumière frappant. La mesure donne pour cent du coefficient de transmission et d'absorption lorsque l'instrument est correctement étalonné. Une fois que vous avez mesuré l'absorbance, trouver la concentration est un simple calcul qui repose sur une formule appelée loi de Beer.
Instructions
1 Notez l'équation suivante: Absorbance = (mouillabilité)
(longueur) (concentration). Cette formule est appelée la loi de Beer. Vous savez l'absorbance à partir de votre expérience, tandis que la composante de longueur est la distance à travers la "cuvette" - le récipient utilisé pour maintenir l'échantillon dans le spectrophotomètre. Pour la plupart des cuvettes de la distance est de 1 cm, bien que vous devriez vérifier. Enfin, absorptivité molaire est une constante spécifique à une substance donnée, du solvant et de longueur d'onde. Calculer absorptivité molaire en utilisant l'absorbance des solutions étalons vous avez mesuré dans votre expérience.
2 Entrez l'absorbance et la concentration d'au moins cinq échantillons standard utilisés dans votre expérience. Ces échantillons standards ont connu la concentration, de sorte que vous pouvez les utiliser pour trouver la absorptivité molaire. Passer cette étape si vous travaillez avec une molécule comme l'ADN dont absorptivité molaire à 260 nm est déjà connu. Pour l'ADN, vous pouvez utiliser la calculatrice dans la section «Ressources» ci-dessous.
3 Utilisez le programme graphique pour représenter graphiquement vos données de la table avec une concentration sur l'axe des x et l'absorbance sur l'axe-y. Dériver une ligne de meilleur ajustement pour ces données en utilisant le programme; cette équation doit être linéaire. La procédure précise variera en fonction du programme graphique que vous utilisez; consulter le mode d'emploi pour votre programme de tableur ou l'aide en ligne si nécessaire.
4 Branchez la valeur d'absorbance pour votre inconnue dans l'équation de votre graphique ligne de meilleur ajustement et de résoudre pour la concentration. Alternativement, si vous avez affaire à une molécule comme l'ADN dont absorptivité molaire à une longueur d'onde donnée est déjà connu, de brancher l'absorbance dans la formule la loi de la bière que vous avez écrit. Divisez absorbance par la longueur et par la constante d'absorption molaire. Cette opération vous donnera la concentration en moles par litre.