Comment faire pour dépanner un système HPLC

June 27

Chromatographie liquide haute performance est un procédé pour la séparation d'un mélange de composés afin de purifier, d'identifier et de quantifier chacune des composantes. HPLC utilise une pompe pour passer un mélange d'intérêt sur une phase solide dans une colonne, et mesure le temps nécessaire pour les composés à passer au-dessus de la phase solide. Le temps de rétention varie en fonction de la force de l'interaction entre la phase solide et le composé d'intérêt, la composition du solvant utilisé et le débit régulé par la pompe. Les composés sont révélés par un pic correspondant à un spectrophotomètre UV / Visible absorbance à une longueur d'onde spécifiée.

Instructions

Étapes de dépannage d'une HPLC

1 Remplacez l'ancien filtre et fritte en dévissant leurs couvertures respectives, jeter le vieux filtre ou fritte, et l'ajout d'un nouveau. Visser les couvercles fermement. Cela permettra d'éliminer le colmatage dans les lignes.

2 Comment faire pour dépanner un système HPLC

Veiller à écrous sont serrés pour éviter les fuites de colonne.

Serrer les écrous avant et après la colonne à l'aide d'une clé d'une taille appropriée.

3 Comment faire pour dépanner un système HPLC

Choisissez tube qui est à la fois courte et de faible diamètre.

Utiliser le tube le plus court possible avec le plus petit diamètre possible de connecter la colonne avec le reste du système. Cela permettra d'éliminer le volume de la colonne supplémentaire qui peut interférer avec la détection du composé.

4 Laver la colonne avec au moins 3 volumes de colonne d'un solvant solide avant l'addition de composés. Cela permettra d'éliminer la contamination et les bulles d'air.

5 Surveiller autant de longueurs d'onde que possible avec votre système HPLC. Choisissez la longueur d'onde qui fournit le pic le plus clair correspondant à votre composé. Un seul, debout, pic pointu doit être observé. Broad, split, ou les pics de résidus sont un signe que le dépannage est nécessaire.

6 Dissoudre le composé d'intérêt dans divers solvants et les injecter sur la colonne. Si les pics sont larges, split, ou la queue à la fin, essayez un système solvant différent.

7 Testez différentes tailles d'injection en spécifiant des quantités de microlitre dans le programme de logiciel pour assurer la surcharge de la colonne est pas responsable des résidus, large, ou les pics fendues.

8 Testez différents systèmes de solvants pour la phase mobile. Différents pourcentages d'eau et de solvants organiques peuvent être utilisés. Surveiller les tailles et formes de pointe pour trouver le système de solvant optimal.

9 Testez le débit pour les composés étant passé au-dessus de la colonne en spécifiant des taux différents et surveillance de la pression de la colonne et la taille maximale et la forme.

dix Si la pression de la colonne est trop élevée, retirez la colonne et le crochet tube ensemble. Exécutez le système de solvant à travers des tubes et de la pression du moniteur. Si le système a haute pression sans colonne, vérifier à nouveau filtre, fritte, et les lignes. Si la pression est faible, sans colonne présente, replacez la colonne et le rincer avec un solvant fort pour éliminer les blocages.

Conseils et avertissements

  • Toujours porter un équipement de protection lorsque vous travaillez dans un laboratoire. Cela comprend une blouse de laboratoire, des lunettes et des gants.