Pour analyser l'ADN par électrophorèse, vous devez d'abord préparer le gel. Comme son nom l'indique, le gel est fabriqué à partir d'un mélange d'un amidon appelé agarose, est habituellement vendu sous forme de poudre. Ne jamais mélanger le gel avec de l'eau pure - vous devez toujours utiliser un tampon ou bien vous aurez des problèmes lorsque vous essayez d'exécuter le gel. La procédure suivante est destinée aux chambres d'électrophorèse de la taille généralement trouvé dans les laboratoires d'enseignement; si votre appareil est plus ou moins grande, ajuster les quantités de chaque produit chimique, selon le cas.
Instructions
1 Mélanger 350 ml d'une solution tampon TAE 1X. Depuis le stock initial est 10X, vous devez mesurer sur 35 ml de la 10X puis ajoutez 315 ml de H2O désionisée (dH2O) et agiter doucement pour mélanger. Vous aurez seulement besoin de 50 ml pour réellement faire le gel d'agarose; le tampon restant sera utilisé dans la chambre d'électrophorèse lui-même.
2 Verser 50 ml de solution tampon 1X dans le flacon Erlenmeyer. Mesurer 0,5 g d'agarose et l'ajouter à la fiole, puis agiter pour mélanger.
3 Une substance Kimwipe dans l'embouchure du flacon et le placer dans le four à micro-ondes. Chauffer pendant 1 minute. NE PAS laisser sans surveillance - éteindre le four micro-ondes, une fois la solution dans le ballon commence à bouillir. Si vous surchauffer la solution, il éclaboussent le micro-ondes et faire un gâchis de temps.
4 En utilisant une pipette Pasteur, déposer une fine ligne de gel le long du lieu où les chicanes dans la chambre d'électrophorèse en contact avec le lit de gel. Placez le peigne sur le lit de gel de sorte que les dents face vers le bas vers le lit. Ajuster la profondeur des dents à l'aide des vis de peigne jusqu'à ce qu'ils soient juste au-dessus du fond de la plaque. Ils ne doivent pas toucher la plaque.
5 Laissez le gel frais à environ 60 degrés Celsius - à quel point le ballon sera toujours chaud au toucher. Ajouter le colorant (par exemple, le bromure d'éthidium ou SYBR-safe) comme dirigé par votre protocole.
6 Verser l'agarose dans le lit de gel et de le laisser refroidir jusqu'à ce qu'il se solidifie.