Comment effectuer peroxydase Taches

October 29

Comment effectuer peroxydase Taches


La détection des anticorps est important tant pour la recherche en laboratoire et de diagnostic clinique. Normalement, les anticorps sont invisibles. Si vous voulez détecter les anticorps dans un morceau de tissu, vous devez utiliser une stratégie autre que simplement en regardant à travers un microscope. Coloration alcaline phosphatase et une coloration à la peroxydase sont deux de ces méthodes. Dans la peroxydase de marquage, une enzyme appelé peroxydase, qui se trouve dans les anticorps, est utilisé pour catalyser une réaction chimique, ce qui entraîne une membrane colorée.

Instructions

1 Mélanger les 10 ml de dérivé de naphtol et la bouteille de solution de benzidine dérivé pour faire une solution de coloration de stock.

2 Mélanger 200 ml de la solution tampon H3PO4 citrique et la bouteille de peroxyde d'hydrogène.

3 Placer 50 ml de la solution tampon dans un 50 à 100 ml cylindre de mesure.

4 Ajouter 2,5 mL de la solution de coloration des stocks en utilisant la micropipette et mélanger.

5 Placez cette solution de coloration dans un plateau en plastique.

6 Laver la membrane avec une solution saline (solution saline tamponnée au phosphate ou une solution saline tamponnée au tris) et le plonger dans la solution de coloration. Laisser tremper pendant entre 10 minutes et 1 heure.

7 Lorsque la bande devient visible, retirez la membrane et le rincer à l'eau courante pendant 10 minutes pour arrêter la réaction.

Conseils et avertissements

  • Mélanger les solutions juste avant de les utiliser. Laisser la réaction se déroule pendant 10 minutes avant d'utiliser la solution. Attendre 30 minutes peut produire de faux résultats.
  • La membrane doit tremper à la température ambiante.
  • Lavez tous vos cylindres et des plateaux dans l'eau, puis dans une solution d'acide sulfurique (environ 1 mole d'acide sulfurique par litre d'eau) pendant 30 minutes ou plus; rincer à l'eau déminéralisée. Laissez-les sécher complètement.
  • Rangez la membrane dans un endroit sombre.
  • Ne laissez pas la solution mère tendre toucher votre peau. Si elle le fait, se laver avec de l'eau immédiatement.