Techniques de dosage Plaque

December 17

Techniques de dosage Plaque


Tout comme il y a des virus qui infectent les humains, il y a aussi des virus qui infectent les bactéries. Les derniers types sont appelés bactériophage, du grec pour les bactéries mangeurs. Les bactériophages ont joué un rôle considérable dans le développement de la biologie moléculaire moderne et ils ont même été suggéré parfois comme un moyen possible de traiter des infections résistantes aux antibiotiques. Le dosage de plaque aide les scientifiques à isoler bactériophage et comprendre combien sont présents dans un échantillon.

Culture du bouillon

La première étape dans la préparation d'un essai de plaque est de cultiver une culture de bouillon bactérien - de préférence à la phase logarithmique précoce (un stade où les bactéries se développent très rapidement). La concentration des bactéries dans le bouillon peut être déterminée par spectrophotométrie (briller la lumière à travers un échantillon et en mesurant la quantité est transmis), ce qui permet aux scientifiques de déterminer la densité des cellules bactériennes dans la culture. Une fois que le bouillon de culture est prêt, vous pouvez préparer le test.

assiette

Le dosage de la plaque utilise une boîte de Petri avec une couche de gélose dur. La plaque doit être maintenu au chaud dans un incubateur jusqu'à utilisation. Pendant ce temps, un échantillon de bactéries sont mélangés avec de l'agar fondu, qui a été gardé au chaud à 50 degrés. La gélose fondue a été préparée avec du bouillon Luria ou un autre mélange qui fournit les nutriments bactéries ont besoin pour croître. Une solution contenant le bactériophage est dilué avec une solution saline stérile ou de bouillon, puis ajouté à la gélose fondue bactéries / mélange. Les scientifiques versez le mélange agar fondu dans la boîte de Pétri et agiter doucement autour de disperser l'agar-agar, puis laisser le temps de la gélose à durcir.

Incubation

Une fois que la gélose a durci, la plaque peut être incubé à une température chaude de sorte que les bactéries vont se développer dans toute la plaque. Le phage reproduire hors de contrôle à l'intérieur des cellules bactériennes infectées, éclater ces cellules ouvertes ou lyser, et alors infecter d'autres bactéries à son tour. La croissance bactérienne crée une "pelouse" à travers la plaque, qui est ponctuée par des taches claires où le phage ont tué toutes les bactéries. Ces taches claires sont appelées plaques.

Comptage et Considérations

Il est important de laisser incuber les plaques pendant la durée appropriée. Trop de temps permet aux plaques de croître en taille au point où ils se chevauchent. En comptant les plaques qui forment, les scientifiques peuvent déterminer combien de phage étaient présents dans l'échantillon original. Ils peuvent aussi isoler une partie du phage qu'ils ont passé de l'agar-agar. Comme toujours en microbiologie, il est important de pratiquer une technique stérile en tout temps tout au long de cette expérience. Contaminer la culture peut ruiner l'expérience.