Définir gradient de sucrose

January 6

Définir gradient de sucrose


gradient de saccharose est une technique de centrifugation utilisée pour séparer les protéines de tailles différentes à partir d'un échantillon. Il peut être utilisé pour isoler et purifier des organites cellulaires aussi bien.

Équipement

Une électrophorèse swing-out d'ultracentrifugation et le rotor, des tubes de centrifugeuse, pH-mètre, la balance de pesée, et les matériaux de western blot sont nécessaires pour séparer les protéines par l'intermédiaire d'un gradient de saccharose.

Solutions

une solution saline tamponnée au phosphate, des solutions de saccharose de concentration 15, 20, 25, 27,5, 30 et 35 pour cent et de l'eau distillée sont nécessaires pour un gradient de saccharose.

Gradient sucrose

Verser la solution de saccharose dans un tube de centrifugeuse unique, à partir de la solution concentrée le plus élevé (35 pour cent) et en finissant par la plus faible (5 pour cent).

pipette Technique

Chaque solution de saccharose doit être livré par l'intermédiaire d'une pipette sur le côté du tube de centrifugation. Le tube doit être vertical, et la pipette devrait être maintenu à un angle. La solution doit glisser vers le bas du tube vers le bas. La couche inférieure sera composé de la solution de 35 pour cent et la couche supérieure se compose de la solution de 5 pour cent.

centrifugation

L'échantillon est place sur le dessus du gradient de saccharose et le tube est placé dans le rotor. Un second tube de poids identique est placé dans le rotor en face de l'échantillon. Le tube est centrifugé à grande vitesse pendant plusieurs heures.

Une analyse

Les fractions sont collectées à partir du tube et analysées par électrophorèse. bandes distinctes de protéines seront visibles.