Si vous êtes nouveau dans le domaine pratique de la génétique, vous trouverez que la connaissance de la façon de concevoir une amorce inverse est essentielle pour presque toutes les positions sur le terrain. Il est une étape cruciale dans la PCR (réaction en chaîne par polymérase), qui amplifie un gène spécifique afin de déterminer sa présence et / ou de la quantité. En sachant comment obtenir l'amorce d'oligonucléotide conçu, vous serez un peu plus à connaître le processus gène-analyse appliquée.
Instructions
1 Entrez la séquence de votre gène d'intérêt dans Primer-BLAST (voir Ressources) pour les espèces appropriées, et saisissez les paramètres selon le cas (par exemple Tm peut varier en fonction des boucles en épingle à cheveux et le contenu GC).
2 Cliquez sur "Get Amorces" d'utiliser le moteur Primer-BLAST. amorces variable peuvent apparaître si elles sont disponibles à votre gène, et leurs séquences seront répertoriés avec leurs propriétés.
3 Choisissez l'amorce qui convient le mieux à votre gène d'intérêt.
4 Concevoir l'amorce de votre séquence choisie. Ce sera difficile de la plupart des gens sans une forte chimie organique de fond, il est donc préférable d'envoyer une demande à une entreprise ou une institution qui va concevoir votre amorce pour vous. Si vous souhaitez concevoir vous-même, voir Ressources pour un protocole établi.
Conseils et avertissements
- Assurez-vous que l'amorce est le complément inverse d'une séquence génomique en dehors de votre gène d'intérêt. Sinon, votre amorce peut recuire mal, ou pas du tout, pendant la PCR.
- Tm doit être pris en considération forte car il peut affecter l'efficacité ou même le succès de la PCR. Voir Ressources pour une calculatrice Tm.
- Évitez les répétitions qui vont entraîner des épingles à cheveux ou des boucles, car cela pourrait conduire à une "amorce-dimères," où les amorces hybrident à eux-mêmes et contaminer votre mélange de PCR.
- Assurez-vous que votre amorce directe ne sera pas recuire à votre amorce inverse.