des techniques d'électrophorèse séparer les molécules d'ADN sur la base de la taille; des techniques similaires pour les protéines peuvent séparer les protéines sur la base de la taille ou de la charge. Dans les deux cas le gel à travers lequel ces molécules migrent est préparée en utilisant une solution tampon, où un tampon est un produit chimique qui agit pour stabiliser le pH. Le tampon remplit plusieurs rôles essentiels dans l'électrophorèse.
Courant
L'électrophorèse sur gel fonctionne en appliquant un courant électrique à la plaque de gel-tampon submergé. molécules d'ADN sont chargées négativement, et les protéines peuvent être faites chargées négativement d'abord en les dénaturant, puis de les traiter avec le dodécylsulfate de sodium (SDS). Les protéines chargées négativement ou des molécules d'ADN migrent loin de la cathode chargée négativement et vers l'anode chargée positivement. Cependant, l'eau est un très mauvais support du courant - il ne transporte le courant efficace quand il a dissous des substances qu'il contient depuis ions chargés se déplacent dans un champ électrique. La solution tampon a une concentration plus élevée d'ions (force ionique plus élevée), de sorte qu'il peut transporter beaucoup plus de courant que l'eau pure.
pH Change
pH mesure la concentration en ions hydrogène. changement de pH peut modifier la charge nette de molécules telles que des protéines ou de l'ADN, provoquant leur migration plus lente (ou plus rapidement). C'est parce que ces molécules ont de nombreux sites basiques qui peuvent accepter des ions hydrogène (protons) et de nombreux sites acides qui peuvent donner des protons. Lorsqu'un acide fait don d'un proton, il devient chargé négativement; lorsqu'une base accepte un proton, en revanche, il se charge positivement. Lorsque la concentration en ions hydrogène de la solution augmente, les protéines et l'ADN deviennent moins négativement chargée (ou plus chargées positivement). Le pH auquel une molécule telle qu'une protéine n'a pas de charge nette est appelé son point isoélectrique. Tampons stabilisent le pH dans le gel à un niveau où les molécules d'ADN seront chargées négativement et migreront comme souhaité.
Stacking Gel
Tampons jouent un rôle encore plus complexe dans une sorte d'électrophorèse appelé SDS-PAGE, ou électrophorèse sur gel de polyacrylamide dodécyl sulfate de sodium. SDS-PAGE est l'une des techniques les plus courantes pour l'analyse des protéines. Les protéines sont dénaturées par un traitement thermique puis enduit avec du sulfate de dodécyle de sodium; Ensuite, ils sont ajoutés aux puits dans le gel, ce qui est généralement exécuté verticalement. Le gel a deux régions, le gel d'empilement (en haut) et le gel en cours d'exécution au-dessous. Le gel d'empilement est préparé avec un tampon différent de sorte que son pH est inférieur à celui du gel en cours d'exécution; En outre, le tampon d'empilement a une force ionique inférieure. Ces deux facteurs provoquent les protéines à «pile» ou deviennent pris en sandwich ensemble comme ils passent à travers le gel de sorte que tous entrer dans le gel en cours d'exécution dans le même temps. Cet effet permet d'assurer le gel sépare les protéines en cours d'exécution sur la seule base de leur taille.
Gel ADN Electrophoresis Tampons
Les deux tampons les plus courants pour l'électrophorèse sur gel de l'ADN sont tris-acétate EDTA et tris-borate EDTA, où EDTA désigne l'acide éthylènediaminetétraacétique. EDTA est importante car elle sert à chélater ou "attacher" ions de magnésium, de les sortir de la solution. Les ions magnésium sont des cofacteurs essentiels pour des enzymes appelées DNases qui coupent l'ADN, de sorte que le EDTA dans le tampon sert une précaution supplémentaire pour éviter tout problème avec DNases.