Comment faire Gels SDS-PAGE

March 13

SDS-PAGE signifie électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécylsulfate de sodium, et est une technique scientifique qui permet de séparer les protéines par leur poids moléculaire sur un gel par l'application d'un courant électrique. La technique permet l'identification de protéines inconnues et la quantification des protéines. Le polyacrylamide agit comme un milieu à travers lequel les protéines migrent et sont visualisées. Faire vos propres gels SDS-PAGE pour l'électrophorèse est une procédure assez simple et ne nécessite qu'une expérience de laboratoire de base.

Instructions

1 Lavez vos mains et mettez vos gants en latex. Créez votre résolution de mélange maître de gel en mélangeant 400 ml d'eau, 250 ml de 1,5 M Tris pH 8,8 et 10 ml 10 pour cent de SDS.

2 Créez votre gel de résolution. Mélanger 1,98 ml de 30 pour cent d'acrylamide, 3,96 ml de résoudre mélange maître de gel, 60 pi de 10 pour cent APS et 2,4 pi de TEMED. Cela fera 6 ml de gel de résolution.

3 Monter vos assiettes en plastique ensemble afin qu'ils sont parfaitement alignés. Fixez le fond et les deux côtés des plaques avec des clips en plastique. Verser le gel de résolution entre les plaques avec votre pipette. Ajouter quelques gouttes d'éthanol sur le dessus du gel de résolution avec votre pipette. Laisser le gel de durcir par polymérisation pendant 30 minutes.

4 Retirer l'éthanol à partir de la partie supérieure du gel de résolution par verser doucement le tout dans un évier. Rincer la partie supérieure du gel avec de l'eau déminéralisée et versez-le. Insérez délicatement une serviette en papier entre les plaques en plastique pour absorber l'excès d'eau au-dessus du gel de résolution.

5 Créez votre empilage mélange maître de gel en combinant 340 ml d'eau, 62,5 ml 1,0 M Tris pH 6,8 et 5 ml 10 pour cent de SDS.

6 Mélanger 0,5 ml de 30 pour cent d'acrylamide, 2,51 ml d'empilement mélange maître de gel, 30 pl de 10 pour cent APS et 3 pi de TEMED pour faire votre mélange de gel d'empilement. Introduire à la pipette 2 ml de gel d'empilement au-dessus du gel de résolution, entre les plaques en plastique. Insérer le peigne du gel SDS-PAGE entre les plaques en plastique. Laisser le gel à sécher pendant 10 à 15 minutes. Retirez délicatement le peigne de gel SDS-PAGE en agitant d'avant en arrière et en tirant vers le haut et vers l'extérieur.