Isotherme calorimétrie de titration (ITC) est une technique pour obtenir des informations sur la réaction de deux molécules. Une solution d'une biomolécule est injectée plusieurs fois dans une solution contenant le partenaire de liaison. La chaleur absorbée ou libérée pendant la réaction est suivie en enregistrant la quantité d'énergie de la machine utilise l'ITC pour maintenir la solution réactionnelle à une température de référence. La lecture ITC produit des pics correspondant à chaque injection, et ceux-ci peuvent être intégrés pour mesurer les quantités de chaleur résultant de la réaction, qui est directement corrélée à l'affinité de liaison des deux molécules.
Instructions
Préparation de l'expérience pour éviter les mauvaises données
1 La machine CCI contient une cellule de référence qui est rempli avec de l'eau ou un tampon pour fournir la température de référence et une cellule de réaction qui contient une molécule à étudier. Un tampon est une solution capable de maintenir le même pH (degré d'acidité) lorsque de petites quantités de composés sont ajoutés. Dissoudre chaque partenaire de liaison dans le même tampon. Un pH-mètre mesure avec précision le pH du tampon. Vérifier le pH de vos solutions de réaction pour assurer qu'ils sont aussi proches que possible. Cela permettra d'éliminer le bruit de fond qui peut interférer avec ou pics de déguisement dans la lecture.
2 Degas tous les échantillons avant de les ajouter à la machine ITC. Cela permettra de réduire les bulles d'air et le bruit de fond de contrôle de l'aide ou des pics supplémentaires dans votre lecture ITC.
3 Remplacer la seringue d'injection si elle est tordue. Cette seringue est utilisée pour injecter une molécule dans la cellule contenant son partenaire de liaison.
4 Ajouter un niveau suffisant de liquide dans la cellule de référence afin de s'assurer que le niveau de l'indicateur de référence ne sont pas trop élevées. dissoudre complètement les tampons avant de les ajouter à la cellule afin d'éviter un niveau de base faible.
Dépannage des données Imprécis
5 Testez différentes concentrations des deux molécules pour trouver les conditions optimales de réaction pour votre réaction. Un rapport de 1: 1 molaire doit être atteint après les injections suivantes.
6 Augmenter le temps entre les injections si la ligne de base semble être à la dérive. La ligne de base doit être régulière.
7 Augmenter le décalage de référence si les lectures de l'énergie sont en dessous de zéro.
8 Changer la température de l'expérience de 5 à 10 degrés Celsius jusqu'à ce que les grands pics sont observés assez si aucun niveau d'énergie est détectée. La réaction est considérée comme faible, voire inexistante si aucun niveau d'énergie est détectée après le réglage de la température.
Proper Clean Up assure une bonne données
9 Laver la seringue d'injection à fond avec plus de 50 ml d'eau, après achèvement des expérimentations. Cela garantira que rien ne précipite dans la seringue, et interfère avec l'expérience suivante.
dix Laver la cellule d'échantillon avec de l'eau à l'aide d'une seringue longue aiguille. Cela permettra d'éviter de précipiter les anciens échantillons dans la cellule et d'interférer avec l'expérience suivante.
11 Laver la cellule d'échantillon avec un détergent compatible avec la machine. Consultez le manuel d'instructions pour une liste de produits nettoyants compatibles.