Les chimistes utilisent la chromatographie liquide à haute performance ou HPLC, pour séparer des mélanges de composés. D'une manière générale, le procédé consiste à injecter un échantillon dans une colonne où il se mélange avec un ou plusieurs solvants. Différents composés adsorbent, ou «bâton» à la colonne à des degrés divers; et que le solvant repousse les composés dans la colonne, l'un des composants du mélange va sortir de la première colonne. L'instrument détecte les composés tels qu'ils sortent de la colonne et produit un chromatogramme qui se compose d'un tracé en fonction du temps de rétention sur l'axe des abscisses et l'intensité du signal provenant du détecteur sur l'axe des ordonnées. Comme les composés sortent de la colonne, ils produisent des «pics» dans le chromatogramme. En général, la plus espacées et plus étroit des pics dans le chromatogramme, plus la résolution. Les scientifiques considèrent une résolution de 1.0 ou supérieur pour représenter une séparation adéquate.
Instructions
1 Mesurer les largeurs des deux pics voisins dans le chromatogramme en notant lorsque les valeurs de l'axe des x sont à la base de chaque pic. L'axe des x représente le temps de rétention, généralement mesurée en secondes. Ainsi, si un pic commence à 15.1 secondes et se termine à 18,5 secondes, sa largeur est (18,5 à 15,1) = 3,4 secondes.
2 Déterminer les temps de rétention en notant le temps, à savoir la position sur l'axe des abscisses, qui correspond aux positions des maxima des pics. Cette valeur sera normalement à mi-chemin entre les deux valeurs utilisées pour calculer la largeur à l'étape 1. L'exemple donné à l'étape 1, par exemple, présenterait un maximum à environ 16,8 secondes.
3 Calculer la résolution, R, entre deux pics par
R = (RT1 - RT2) / [0,5 * (W1 + W2)],
où RT1 et RT2 représentent les temps de rétention des pics 1 et 2, et W1 et W2 représentent les largeurs des pics pris au niveau de leurs bases. Reprenons l'exemple des étapes 2 et 3, un pic présente un temps de rétention de 16,8 secondes et une largeur de 3,4 secondes. Si le second pic a présenté un temps de rétention de 21,4 secondes, avec une largeur de 3,6 secondes, la résolution serait
R = (21,4 à 16,8) / [0,5 * (3.4 + 3.6)] = 4,6 / 3,5 = 1,3.