Un spectrophotomètre est utilisé pour déterminer la concentration de certains composés, tels que des protéines, dans une solution. En général, une lumière brille à travers une cuve remplie d'un échantillon. La quantité de lumière qui est absorbée par l'échantillon est mesurée. Comme composés absorbent la lumière dans différentes gammes spectrales, la bonne longueur d'onde doit être définie pour l'analyse. Il existe de nombreuses façons de calculer la concentration d'échantillons inconnus par spectrophotométrie, mais en utilisant des normes de référence donne la meilleure précision. En outre, les normes indiquent également si le spectrophotomètre est des problèmes qui fonctionnent mal ou autres avec l'analyse.
Instructions
Calcul par les équations de ligne droite
1 Analyser les étalons de référence au début de l'analyse. Les normes sont connues concentrations et sont utilisées pour étalonner le matériel et vérifier l'exactitude. Tous les échantillons doivent se situer dans la plage de travail des normes. Dans le cas contraire, les échantillons doivent être dilués ou la concentration des normes accrue.
2 Faites un tableau de points ou graphique linéaire avec des lectures de concentration et d'absorption standard. La concentration sera sur l'axe des ordonnées, l'absorbance sur l'axe des abscisses. Par exemple, les normes sont de 1 ppm, 2,5 ppm et 5 ppm. L'absorbance donnée était de 1 ppm = .25, 2,5 ppm = 0,5, et 5 ppm = .75.
3 Formater la ligne de tendance à afficher une équation sur le graphique. L'équation indique la formule y = mx + b. Par exemple, en utilisant les normes de l'étape 2 de l'équation est y = 0,1531 + .1224x. La plupart des lignes de tendance sont interceptées à zéro, mais cela dépend de la méthode analytique et la valeur R-squared.
4 Analyser des échantillons inconnus et des lectures fiche d'absorption.
5 Utiliser l'équation (y = mx + b) pour déterminer la concentration d'échantillons.
Comprendre en ligne droite Equation
6 Soit "Y" égale à la concentration. Ceci est ce qui sera résolu pour.
7 Soit "X" égale à la capacité d'absorption de l'échantillon. Ceci est la capacité d'absorption mesurée par le spectrophotomètre.
8 Autoriser "" pour égaler la pente et "b" pour égaler le ordonnée à l'origine. Les deux sont donnés, si la ligne de tendance a été forcée à 0, puis "B" sera de 0.
9 Résolvez pour la concentration. En utilisant l'exemple à l'étape 3, remplacer «x» comme une capacité d'absorption donnée de 0,563. Donc:
y = 0,1224 (0,563) + 0,1531
y (concentration) = 0,222011
Conseils et avertissements
- Les unités de concentration sont les mêmes que les normes. Par exemple, les unités sont des parties par million (ppm) ou en parties par milliard (ppb).
- les normes et les échantillons de référence sont facilement contaminés.
- Toujours lire toutes les parties du test ou de la méthode avant de développer.