L'électrophorèse est une méthode fréquemment utilisée en biochimie et biologie moléculaire pour séparer des macromolécules, généralement des protéines ou des acides nucléiques. Cette séparation permet de protéines individuelles ou des séquences d'acides nucléiques devant être isolés et analysés à partir d'un mélange complexe d'entre eux. Un exemple typique de son utilisation serait de séparer des fragments d'ADN qui ont été produites à partir d'une communauté microbienne par PCR (Polymerase Chain Reaction).
Principes de Electrophoresis
Electrophorèse sépare les molécules le long d'un gradient en fonction de leur taille, la charge ou les propriétés. Gradient qui peut être un champ électrique ou, dans le cas de la dénaturation Gradient Gel Electrophoresis (DGGE), un agent dénaturant, tel qu'un mélange d'urée et de formamide. Les protéines migrent vers l'anode si elle est chargée négativement et la cathode si elle est chargée positivement; la distance de migration en fonction de la taille.
Dénaturation Gradient Gel Electrophoresis
Avec DGGE, l'ADN se déplace le long d'un gradient d'augmentation de la puissance dénaturant, jusqu'à ce que la puissance est suffisante pour dénaturer ce fragment d'ADN particulier. À ce stade, la migration cesse, ce qui signifie que les fragments seront séparés en fonction de leur sensibilité à la dénaturant.
Qu'est-ce que la mémoire tampon ne
Dans le cas de l'électrophorèse qui sépare sur la base de la charge, la charge est transmise par les ions fournis par le tampon. Le tampon, en fournissant un réservoir d'acide faible et la base, conserve également le pH dans une fourchette étroite. Ceci est important parce que la structure et la charge d'une protéine ou d'acide nucléique va changer si elle est soumise à des changements de pH significatifs, empêchant ainsi une séparation correcte.
tampons typiques
Différents tampons fonctionnent mieux pour différentes gammes de pH souhaitées. tampons typiques utilisés comprennent les acides acétique, borique, phosphorique et l'acide citrique, la glycine et la taurine. En règle générale, la valeur pKa (de constante de dissociation acide) devrait être proche du pH requis, et les tampons fournissant espèces de grandeur de charge faible sont préférés, afin de ne pas effectuer trop de courant.
Résumé
Electrophorèse sépare macromolécules par la taille, la charge et / ou des propriétés, et un tampon est nécessaire pour fournir un pH stable et la conduction de la charge.