Une fois que vous avez exécuté des échantillons d'ADN sur un gel d'agarose et pris une photo, vous pouvez enregistrer l'image pour plus tard, à quel point vous pouvez analyser les résultats et les interpréter. Le genre de choses que vous cherchez dépendra de la nature de votre expérience. Si vous faites des empreintes génétiques, par exemple, vous aurez envie de comparer la taille des fragments d'ADN à partir de deux échantillons - du suspect et d'un échantillon de scène de crime, peut-être. Si vous travaillez avec des plasmides à partir de bactéries, par contre, vous pourriez avoir besoin pour vous assurer que le plasmide contient l'insert. Par conséquent, comment vous interprétez votre gel dépendra en partie de l'expérience que vous avez fait. Néanmoins, il y a quelques règles générales, vous pouvez appliquer.
Instructions
1 En partant du haut de l'image, mesurer la distance à chaque bande dans le "normes" voie de votre gel (aka l'échelle). La voie des normes contient des morceaux d'ADN dont la taille est déjà connue, donc vous devriez déjà connaître la taille de chaque avant de commencer votre expérience. En outre mesurer la distance parcourue par les bandes dans chacune des voies échantillon.
2 Diviser la distance de chaque niveau et chaque bande dans les échantillons parcourus par la distance au bas du gel. Le résultat est appelé la mobilité relative. Vous pouvez utiliser le programme de tableur pour faire le calcul pour vous si elle va faire cette étape plus rapide.
3 Entrez la mobilité relative et la taille de chaque norme dans votre programme de feuille de calcul, puis utilisez l'outil graphique de votre programme de feuille de calcul pour créer un graphique de ces données avec la mobilité par rapport à l'axe des x et la taille de l'y.
4 Mettre en place une ligne au graphique en utilisant une régression non linéaire. Consultez la section Aide de votre programme de feuille de calcul si vous avez besoin de savoir comment faire cela. Vous devriez vous retrouver avec une équation, peut-être semblable à ce qui suit:
y = (0,3) -2,5 x ^
Notez que x ici sera la mobilité relative, tandis que y est la taille. Notez également que votre équation peut avoir complètement différents chiffres pour l'exposant et le coefficient - cette équation est simplement fourni un exemple hypothétique.
5 Prendre la mobilité relative pour les bandes de votre échantillon et le brancher comme x pour calculer la taille des morceaux d'ADN dans les bandes d'échantillon.
Supposons que l'équation dérivée par votre programme de feuille de calcul était en effet = y (0,3) x ^ -2.5, et la mobilité relative d'une bande d'échantillon particulier était de 0,68. Substituer 0,68 dans votre équation, vous trouverez ce qui suit:
y = (0,3) (0,68) ^ - 2,5
Utilisation de votre calculatrice, vous soulevez 0,68 à -2,5 et trouver ce qui suit:
y = (0,3) (2,62)
y = 0,786
qui aurait alors la taille estimée en kilobases de l'ADN dans l'une des bandes de votre échantillon.
Plasmides
6 Notez que vous pouvez ou ne pas avoir besoin d'utiliser les instructions de cette section. une électrophorèse sur gel d'agarose est souvent utilisé pour confirmer qu'un plasmide contient un insert donné. Si vous ne travaillez pas avec des plasmides, vous pouvez sauter cette section. Si vous êtes, cependant, vous pouvez suivre ces instructions.
7 Notez que si vous travaillez avec des plasmides non coupés ou entaillés, vous ne pouvez pas estimer la taille en utilisant la procédure de la section 1 ci-dessus. En effet, les plasmides non coupés et entaillés migrent à des vitesses différentes de l'ADN linéaire.
8 Comparez le nombre de bandes dans chaque couloir. Rappelons qu'une enzyme de restriction coupe l'ADN au niveau des sites où une séquence donnée appelée le site de restriction est présente. Si un échantillon a été traité par deux enzymes de restriction, une bande pour l'insert et une bande pour le reste du plasmide doivent tous deux être présents. En effet, l'insert sera flanqué de deux sites de restriction, chacun pour une enzyme différente, de sorte que les coupes à la fois de ces sites permettra de libérer l'insert du plasmide. Une coupe à un seul site, en revanche, permet de convertir le plasmide d'ADN linéaire. Un échantillon coupé sans enzymes de restriction ou d'une enzyme de restriction, alors, devrait comporter une seule bande, tandis qu'un échantillon coupé avec deux enzymes de restriction devraient figurer deux bandes.
9 Look out pour les bandes créées par l'ADN plasmidique entaillé. Un plasmide entaillé a une coupe dans un seul brin seulement, il migre plus lentement qu'un plasmide coupé. plasmides coupés à son tour migrent plus lentement que l'ADN non coupé.
dix Estimer la taille de l'insert selon la procédure décrite dans la section 1 et déterminer si elle correspond à vos attentes (qui varie en fonction de l'expérience.)